HSF1對(duì)LPS誘導(dǎo)的G-CSF基因表達(dá)的影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、熱休克因子1(heat shock factor 1，HSFl)是一種在熱休克反應(yīng)過程中激活的轉(zhuǎn)錄因子，除了能與HSPs基因啟動(dòng)子區(qū)的熱休克元件(heat shock element，HSE)結(jié)合從而誘導(dǎo)熱休克蛋白基因表達(dá)外，還能直接或者間接調(diào)節(jié)許多非熱休克蛋白基因的表達(dá)。本室近年采用高通量基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)HSFl基因敲除(HSFl<'+>)小鼠內(nèi)毒素血癥時(shí)有15個(gè)炎癥相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，其中之一就是粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocy

2、te-colony stimulating factor,G-CSF)，這提示G-CSF可能是HSFl調(diào)控的靶基因之一。本研究旨在探討HSFl對(duì)G-CSF基因誘導(dǎo)表達(dá)的調(diào)控并揭示其可能的調(diào)控機(jī)制。 本研究利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)HSFl和失活型HSFl(缺失轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域)的RAW264.7細(xì)胞株，用ELISA技術(shù)從蛋白水平觀察HSFl對(duì)LPS所致的G-CSF分泌的影響；利用生物信息學(xué)技術(shù)分析G-CSF基因啟動(dòng)子區(qū)的基本結(jié)構(gòu)，構(gòu)建含G

3、-CSF基因啟動(dòng)子序列的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒觀察上述兩種HSFl對(duì)LPS誘導(dǎo)的G-CSF基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響；利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)HSFl的RAW264.7細(xì)胞株，用Westem blotting觀察HSFl對(duì)LPS所致的核內(nèi)核因子白介-6(nucleaur factor-interleukin6，NF-IL6)水平改變的影響；用EMSA觀察全長(zhǎng)和失活性HSFl對(duì)LPS所致的NF-IL6與G-CSF基因啟動(dòng)子結(jié)合的影響。結(jié)果顯示：

4、 1．全長(zhǎng)和失活型HSFl都能抑制LPS所致RAW264.7細(xì)胞G-CSF的分泌； 2．生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，G-CSF基因啟動(dòng)子區(qū)沒有完整的HSE，但核心啟動(dòng)子區(qū)及其上游各存在1個(gè)NF-IL6的結(jié)合元件； 3．全長(zhǎng)和失活型HSFl均可抑制LPS誘導(dǎo)的G-CSF基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性； 4．全長(zhǎng)HSFl可以抑制LPS所致的核內(nèi)NF-IL6的增多； 5．全長(zhǎng)和失活型HSFl可以抑制LPS所致的NF-IL6與G-

5、CSF基因啟動(dòng)子的結(jié)合。 綜上所述，HSFl通過抑制LPS所致的NF-IL6與G-CSF基因啟動(dòng)子的結(jié)合和核內(nèi)NF-IL6的增多，從而抑制LPS所致的G-CSF的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白分泌，且上述功能并不依賴HSFl的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域的存在。鑒于HSFl可通過亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域(1eucine zipper domain)與轉(zhuǎn)錄因子NF-IL6結(jié)合，且G-CSF基因啟動(dòng)子區(qū)不存在HSE，故HSFl可能通過與NF-IL6相互作用而抑制LPS所