海南坡鹿HSF1 cDNA的克隆與表達(dá).pdf

1、對(duì)熱休克轉(zhuǎn)錄因子1-HSF1,的研究對(duì)于熱休克反應(yīng)分子機(jī)制的闡釋具有重要的理論意義。本研究通過RT-PCR和RACE方法擴(kuò)增海南坡鹿HSF1-hdHSF1,cDNA全長,將擴(kuò)增產(chǎn)物與pMD20-T載體連接,重組質(zhì)粒酶切鑒定后測序并進(jìn)行生物信息學(xué)分析;構(gòu)建pET28a-hdHSF1表達(dá)載體,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,進(jìn)行SDS-PAGE、Western blot分析。結(jié)果顯示,克隆的hdHSF1cDNA全長2036 bp,含有1個(gè)1578bp

2、的開放閱讀框,編碼525個(gè)氨基酸,目的蛋白是一個(gè)等電點(diǎn)為4.93的親水性蛋白。hdHSF1 cDNA與赫里福德牛、小鼠和人HSF1 cDNA的同源性分別為98.99％、81.78％、87.82％;相應(yīng)編碼蛋白氨基酸同源性分別為98.86％、83.84％、89.06％,根據(jù)氨基酸序列構(gòu)建不同動(dòng)物HSF1蛋白的進(jìn)化樹,與采用傳統(tǒng)分類法構(gòu)建的進(jìn)化樹基本一致,說明實(shí)驗(yàn)成功克隆了hdHSF1基因。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,得到一個(gè)帶組氨酸標(biāo)簽的約62