鴨和鵝B淋巴細(xì)胞刺激因子的研究.pdf

1、本文就鴨和鵝B淋巴細(xì)胞刺激因子進(jìn)行了研究，主要內(nèi)容如下： 第一部分鵝可溶性B淋巴細(xì)胞刺激因子的克隆、表達(dá)和活性研究 B淋巴細(xì)胞刺激因子是屬于TNF家族的，對B細(xì)胞分化和存活起著重要作用的一種細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)我們通過RT-PCR的方法從鵝的脾臟中擴(kuò)增得到了鵝BAFF的全長cDNA序列。鵝BAFF的開放讀碼框由288個氨基酸組成。鵝的BAFF在氨基酸水平上與雞、鴨、人、鼠的BAFF的相似性分別為92％，98％，55％，44％

2、。RT-PCR的結(jié)果顯示鵝BAFF表達(dá)與法氏囊，脾臟和胸腺中。在大腸桿菌中表到的鵝可溶性BAFF的分子量大約為19kDa。通過鎳柱純化得到的鵝BAFF在體外可以促進(jìn)雞，鴨，鵝的法氏囊B細(xì)胞的存活或增殖。同時我們也看到雞和鴨的BAFF同樣也可以促進(jìn)雞，鴨，鵝的法氏囊B細(xì)胞的存活或增殖。這個結(jié)果表明鵝的BAFF在鵝的B細(xì)胞的存活或增殖上起著重要的作用；由于在進(jìn)化上的保守性，雞，鴨，鵝的BAFF存在著交叉反應(yīng)。將鴨B淋巴細(xì)胞刺激因子和增強(qiáng)型綠

3、色熒光蛋白通過(Gly4Ser)2linker相連接，在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白EGFP-dsBAFF；并對該蛋白進(jìn)行Ni2+-IDA親和層析柱純化，純化的蛋白經(jīng)檢測具有EGFP的熒光活性和dsBAFF的B淋巴細(xì)胞促存活活性。 第二部分石斑魚和豬GILT的研究 GILT在MHCⅡ型抗原呈遞和加工中發(fā)揮著重要作用，它能催化二硫鍵的還原，從而有利抗原被蛋自水解酶水解。本實(shí)驗(yàn)通過RT-PCR，和RACE的方

4、法從石斑魚和豬的脾組織細(xì)胞中擴(kuò)增得到石斑魚GILT(osgGILT)和豬的GILT(pGILT）基因。osgGILT全長cDNA為1066bp，編碼260個氨基酸；pGILT全長cDNA為1062bp，編碼246個氨基酸。通過Real-time PCR檢測osgGILT和pGILT在石斑魚和豬的各個組織中的表達(dá)表明，osgGILT高表達(dá)于脾臟和腎臟中，而pGILT高表達(dá)于脾臟和血液中。通過LPS刺激過后在豬的脾臟和血液中GILT的表達(dá)量