2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、為改進(jìn)黑曲霉對外源蛋白的分泌表達(dá),該論文采用同源重組方法,分別使編碼胞外酸性蛋白酶pepB基因和參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)降解相關(guān)基因ubc7基因缺失,研究這兩個基因?qū)ν庠吹鞍灼崦傅挠绊?1.以Aspergillus niger GICC2773基因組DNA為模板,用PCR方法分別擴(kuò)增pepB基因中的上游約1.4kb和下游約1.3kb兩段DNA序列,將此兩段序列按同一方向分別插入質(zhì)粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表達(dá)單元的5'和3'端.構(gòu)建成重組質(zhì)

2、粒pXW1-pepB,用于通過同源重組靶向破壞基因組中的pepB基因.同源重組則采用原生質(zhì)體—PEG方法,將酶切pMW1-pepB得到的線性片段轉(zhuǎn)化A.niger GICC2773菌株,通過潮霉素選擇平板得到62個Hgy抗性轉(zhuǎn)化子,然后采用PCR方法從這些抗性轉(zhuǎn)化子中篩選到1個由于同源重組產(chǎn)生的pepB基因缺失突變菌株pepB29.功能分析顯示該突變株的酸性蛋白酶活性有明顯下降,外源蛋白酶漆酶的分泌表達(dá)有所提高.2.以Aspergill

3、us niger GICC2773基因組DNA為模板,用PCR方法分別擴(kuò)增ubc7基因中的上游約1.6kb和下游577bp兩段DNA序列,將此兩段序列按同一方向分別插入質(zhì)粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表達(dá)單元的5'和3'端.構(gòu)建成重組質(zhì)粒pMW1-ubc7,用于通過同源重組靶向破壞基因組中的ubc7基因.同源重組則采用原生質(zhì)體—PEG方法,將酶切pMW1-ubc7得到的線性片段轉(zhuǎn)化A.niger GICC2773菌株,通過潮霉素抗

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