氟對大鼠骨組織RBPJ及相關基因表達的影響.pdf

1、目的：通過研究氟中毒大鼠骨組織中RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5基因表達變化,探討Notch通路與氟骨癥關系，為氟骨癥發(fā)生機制提供理論依據(jù)。
　　方法:成年SD大鼠24只，隨機分為3組：對照組（飲水含氟<1mg/L），低氟組（飲水含氟50mg/L），高氟組（飲水含氟100 mg/L），每組8只，組內(nèi)雌雄各半。飼養(yǎng)6個月后，收集動物尿樣，觀察氟斑牙發(fā)生情況，采用氟離子選擇電極法測定尿氟和骨氟，常規(guī)石蠟切片HE染色觀察骨組織

2、學變化并采用圖像分析軟件測定骨組織形態(tài)學指標，免疫組化法（Immunohistochemistry,IHC）觀察成骨細胞中RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5蛋白表達情況，免疫印跡法(Western blot)和實時熒光定量 PCR法(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分別檢測骨組織RBPJ、Notch3、Jag1和Hes5蛋白與mRNA表達量。
　　結(jié)果：1.氟骨癥大鼠模型復制成功，表現(xiàn)

3、為染氟組出現(xiàn)不同程度氟斑牙，同時與對照組（2.00±0.34 mg/L、1753.67±184.68μg/g）比較，低氟組（11.80±1.08 mg/L、5974.76±2036.13μg/g）、高氟組(18.08±1.13 mg/L、7996.51±2669.93μg/g)大鼠尿氟和骨氟明顯升高（P<0.05）；且染氟組大鼠骨皮質(zhì)厚度、骨小梁寬度、骨小梁密度、成骨細胞指數(shù)明顯升高（P<0.05），表現(xiàn)骨質(zhì)硬化病理改變特征。2. We

4、stern blot法檢測顯示，高氟組大鼠骨組織Notch3蛋白（0.201±0.093）顯著低于對照組（0.434±0.218， P<0.05）；Jag1蛋白在高氟組（0.112±0.024）大鼠的表達水平不僅明顯低于對照組（0.516±0.144），也明顯低于低氟組（0.475±0.189， P<0.05）；而低氟組（4.985±0.913），高氟組（4.279±1.507）大鼠 RBPJ蛋白表達升高，與對照組（2.892±1.00

5、1）比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；低氟組（0.147±0.039），高氟組（0.128±0.039）Hes5蛋白表達則又明顯低于對照組（0.282±0.099，P<0.05）。3.采用免疫組化法觀察成骨細胞上述因子表達情況，并對陽性成骨細胞Notch3、Jag1、RBPJ、Hes5平均光密度的檢測發(fā)現(xiàn)，低氟組，高氟組大鼠Notch3平均光密度（0.022±0.007，0.019±0.005）、Jag1平均光密度（0.024±0.

6、008，0.029±0.009）水平明顯低于對照組（0.045±0.016、0.044±0.023，P<0.05），而低、高氟組RBPJ平均光密度（分別為0.032±0.017，0.033±0.017）明顯高于對照組（0.021±0.013， P<0.05）；但染氟組與對照組之間Hes5平均光密度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。4.RT-qPCR法檢測骨組織內(nèi)上述因子mRNA水平，結(jié)果顯示高氟組大鼠骨組織Notch3 mRNA（0.0

7、044±0.0040）、Jag1 mRNA（0.0057±0.0054）相對表達量明顯低于對照組（0.0116±0.0072、0.0087±0.0059，P<0.05），同時高氟組大鼠骨組織Jag1 mRNA相對表達量也明顯低于低氟組（0.0066±0.0060，P<0.05）；而低氟組（0.0058±0.0037），高氟組（0.0055±0.0044）大鼠RBPJ mRNA相對表達量明顯低于對照組（0.0122±0.0059，P<0.

8、05）；但染氟組與對照組之間Hes5 mRNA相對表達量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。5.相關性分析顯示大鼠成骨細胞中RBPJ蛋白水平與成骨細胞指數(shù)呈正相關關系（r=0.465，P<0.05），Notch3蛋白水平與骨皮質(zhì)厚度、骨小梁寬度、骨小梁密度、成骨細胞指數(shù)均呈負相關關系（r=-0.612、-0.557、-0.640、-0.716，P<0.05），Jag1蛋白水平與骨小梁寬度、骨小梁密度均呈負相關關系（r=-0.446、-0.