固定金屬離子親和膜的制備及其在木瓜蛋白酶分離純化中的應(yīng)用.pdf

1、親和膜色譜技術(shù)具有流速高、分離速度快、壓降低、處理量大、選擇性強(qiáng)、易于放大規(guī)?；a(chǎn)等顯著優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)的分離純化中得到了快速發(fā)展。
　　 木瓜蛋白酶(EC3.4.22.2)主要存在于番木瓜果實(shí)中的乳汁中，廣泛應(yīng)用于食品、皮革、紡織、日化和制藥行業(yè)等行業(yè)，由于傳統(tǒng)的分離方法工藝繁瑣，純度不高，不能達(dá)到現(xiàn)代工業(yè)的需求，而且很難規(guī)模化生產(chǎn)。
　　 本文以尼龍膜為基質(zhì)，四種不同金屬離子作為配基，制備了一系列新型的分離木瓜蛋白酶

2、的材料，通過(guò)掃描電鏡，紅外光譜和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜研究其物理性能，并研究金屬離子螯合的最佳條件，包括吸附時(shí)間、金屬離子溶液pH值、膜量等。同時(shí)對(duì)制備的固定金屬離子親和膜純化木瓜蛋白酶的色譜性能進(jìn)行了研究，確定了純化的最佳條件，包括吸附的時(shí)間、緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度以及洗脫液的種類、上樣速度、洗脫速度、洗脫液的pH值和離子強(qiáng)度等。最后，應(yīng)用此親和膜從木瓜粉中純化木瓜蛋白酶，并用電泳進(jìn)行了表征。本文還以動(dòng)態(tài)學(xué)的方法研究了配基為不

3、同金屬離子的親和膜與木瓜蛋白酶之間的相互作用的等溫吸附和動(dòng)力學(xué)模型。結(jié)果表明，螯合銅離子的最佳條件為30分鐘，pH4.0，電鏡照片顯示該固定金屬離子親和膜的孔徑明顯降低，但也足以讓大分子蛋白質(zhì)自由通過(guò)，螯合在膜上的金屬量用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀檢測(cè)，分別為4402.1、658.1、339.6、1258.3μg/g(固定銅、鎳、鋅、鈷金屬離子親和膜)。而銅、鎳、鋅、鈷四種固定金屬離子親和膜吸附木瓜蛋白酶的最佳時(shí)間分別是60，50，

4、50，30分鐘；最佳反應(yīng)pH值分別是8.0，10.0，9.0，9.0;最佳離子強(qiáng)度(即NaC1的濃度)都是0mol/L;最佳洗脫液為NaSCN溶液;最佳上樣速度都是2.0ml/min，最佳洗脫速度都是1.0ml/min，洗脫液的最佳pH值和離子強(qiáng)度(即NaCl的濃度)都是5.0和1.0mol/L;固定鋅離子親和膜洗脫下來(lái)酶的比酶活最高，其純化倍數(shù)為27.06;四種固定金屬離子親和膜對(duì)木瓜蛋白酶的吸附行為都滿足Freundlich模式，動(dòng)