脂代謝重編程在宮頸癌放療抵抗中的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、宮頸癌(cervical cancer)是嚴(yán)重威脅婦女健康的常見惡性腫瘤之一，占全球女性的第三位。近年來發(fā)病率不斷上升，大約每年有460，000新發(fā)病例，其中約274，000萬患者死亡，且發(fā)病逐漸年輕化。放射治療在宮頸癌的治療中具有極其重要作用和地位，尤其對(duì)于已失去手術(shù)機(jī)會(huì)的中晚期及復(fù)發(fā)宮頸癌，放射治療是其主要的治療手段。近年來，雖然隨著放療技術(shù)的發(fā)展及放療設(shè)備的優(yōu)化，其臨床治療效果有了一定程度的提高，但總體療效仍不樂觀，放療抵抗是治療

2、失敗的主要原因。因此，探討宮頸癌放療抵抗的機(jī)制，提高其放療敏感性對(duì)于其治療具有十分重要臨床意義。
　　代謝重編程在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。既往對(duì)于代謝重編程在腫瘤生物學(xué)特性中的研究表明其可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡耐受、促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移以及化療耐受.但代謝重編程是否參與宮頸癌放療抵抗尚不明確。
　　線粒體是細(xì)胞的能量供應(yīng)的主要場(chǎng)所，維持線粒體功能正常對(duì)確保細(xì)胞在應(yīng)激狀態(tài)下能量供應(yīng)充足而對(duì)抗凋亡具有重要意義。線粒體氧化磷酸化過程中

3、釋放ROS導(dǎo)致線粒體損傷，受損線粒體釋放細(xì)胞色素C及Caspase等誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此有效清除受損線粒體是維持線粒體功能正常的重要保障。既往研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，放療可誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬發(fā)生，自噬抑制劑（3-MA）能顯著增強(qiáng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞對(duì)放射線的敏感性表明自噬在細(xì)胞對(duì)放射線的反應(yīng)中起保護(hù)作用。放射線誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，增加HeLa及H1299細(xì)胞放療敏感性。但線粒體自噬在宮頸癌的放療抵抗中的作用及其機(jī)制尚不明確。因此本課題擬在前期宮頸癌放療

4、抵抗細(xì)胞株的建立基礎(chǔ)上，探究宮頸癌放療抵抗的能量代謝基礎(chǔ)及線粒體自噬在在宮頸癌的放療抵抗中的作用及機(jī)制。
　　目的:
　　1.明確宮頸癌放療抵抗細(xì)胞株的能量代謝特點(diǎn);
　　2.證實(shí)線粒體自噬在宮頸癌放療抵抗中的作用;
　　3.探討代謝重編程調(diào)控線粒體自噬介導(dǎo)宮頸癌放療抵抗的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用基因芯片分析放宮頸癌Hela及Hela-R細(xì)胞的基因表達(dá)譜;采用Western-blot等方法

5、，檢測(cè)Hela及Hela-R細(xì)胞中代謝酶的表達(dá)特點(diǎn)及其相關(guān)性。
　　2.采用代謝組學(xué)及脂質(zhì)組學(xué)分析Hela及Hela-R細(xì)胞的代謝特點(diǎn)，seahorse檢測(cè)兩組細(xì)胞線粒體功能(OCAR)及糖酵解能力(ECAR)。采用激光共聚焦和透射電鏡，觀察射治療條件下宮頸癌細(xì)胞的線粒體膜電位(Δψ)及線粒體自噬情況;
　　4.慢病毒載體建立CRLS1敲低及過表達(dá)的細(xì)胞模型用于研究CRLS1對(duì)宮頸癌放療抵抗的作用及機(jī)制。
　　結(jié)果:<

6、br>　　1.基因芯片、Western-blot及代謝組學(xué)結(jié)果表明，Hela與Hela-R細(xì)胞相比，糖酵解無明顯差異，而線粒體內(nèi)脂質(zhì)氧化明顯增強(qiáng)
　　2.Mitotracker及seahorse結(jié)果表明，Hela-R細(xì)胞的線粒體功能明顯高于其親本Hela細(xì)胞。
　　3.電鏡及激光共聚焦結(jié)果表明，放療抵抗細(xì)胞株在接受放射線照射后線粒體自噬明顯高于親本
　　4.CRLS1表達(dá)上調(diào)增加線粒體心磷脂從而增強(qiáng)線粒體自噬。