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文檔簡介
1、胚胎干細胞具有的自我更新及多向分化潛能兩大特性，是細胞移植治療手段的首選來源，也成為近年研究的熱門領(lǐng)域。 本研究運用基于BAC的同源重組技術(shù)構(gòu)建小鼠胚胎干細胞(mES細胞)Nanog基因報告體系。首先挑選包含Nanog基因啟動子的BAC，通過同源重組，直接從BAC上套取Nanog啟動子。再次同源重組，將報告基因插入Nanog/EGFP插入Nanog基因啟動子之后，高效構(gòu)建了Naong/EGFP打靶載體。通過電穿孔的方法，將打靶
2、載體導(dǎo)入mES細胞系R1中，篩選后獲得基因打靶的陽性細胞R5。經(jīng)鑒定，R5與R1分化前具有相似的基因表達情況；R5與R1具有形成EB(embryonic body)的能力。用RT-PCR分析此兩種EB，結(jié)果表明，R5及R1所形成的EB均表達內(nèi)、中、外三個胚層的標志基因SOX17、Nkx2.5及Nestin。由此說明，打靶后的mES細胞R5具有與mES細胞R1相似的特性。同時，用免疫細胞化學(xué)的方法對自發(fā)分化前后的R5細胞進行OCT4的標染
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