PBA抑制博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化過程中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：
　　為了研究PBA對于博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化及肺纖維化發(fā)生過程中肺泡上皮細胞上皮-間葉轉(zhuǎn)化的影響；
　　方法：
　　取成年ICR雄性小鼠（28-32g）。隨機分為四組：空白對照組（Control），單純PBA對照組（PBA），肺纖維化模型組（BLM），PBA保護組（BLM+PBA）。在肺纖維化模型組中，一次性給予小鼠氣管內(nèi)注射博萊霉素（3.0mg/kg）。在PBA保護組中，同時給予小鼠每天腹腔注射PBA（1

2、50mg/kg），給予小鼠博萊霉素21天后處死小鼠，取出肺組織。留取部分肺組織福爾馬林固定，石蠟包埋后切片HE染色了解各組小鼠肺組織中炎癥浸潤情況，天狼星紅染色了解各組肺組織纖維化情況，同時留取切片用于免疫組織化學(xué)檢測了解α-SMA及NF-κb在各組小鼠肺組織中的表達。提取肺組織總蛋白用于測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、p-eIF2α、eIF2α、IRE1α、p-IRE1α及EMT特異性分子α-SMA等在肺組織中的表達。

3、提取肺組織RNA，利用RT-PCR測定TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1等炎性因子及膠原基因Col1α1和Col1α2在各組小鼠肺中的表達。
　　結(jié)果：
　　在肺纖維化模型組中，給予小鼠氣管內(nèi)注入博萊霉素21天后，蛋白印跡試驗證實纖維化模型組小鼠肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、p-eIF2α、p-IRE1α表達較正常對照小鼠明顯升高，而給予PBA后可以明顯抑制小鼠肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的水平

4、的升高；HE染色證明肺纖維化模型組小鼠肺組織中炎癥浸潤明顯，給予PBA后可以抑制小鼠肺組織中炎癥浸潤程度；免疫組化提示纖維化模型組小鼠中NF-κb陽性細胞明顯增多，而給予PBA后可以明顯減少NF-κb陽性細胞的數(shù)量；RT-PCR結(jié)果提示肺纖維化模型組小鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1基因表達水平明顯升高，給予PBA后可以明顯抑制這些炎性因子基因的表達；免疫組化及蛋白印跡實驗證實肺纖維化模型組小鼠肺組織中α-SM

5、A表達明顯升高，PBA可以明顯抑制α-SMA在小鼠肺組織中的表達；天狼星紅染色提示給予小鼠氣管內(nèi)注射博萊霉素21天后可見肺組織中膠原蛋白明顯增多，PBA可以減輕博萊霉素所致的肺纖維化程度；同時RT-PCR提示肺纖維化模型組中膠原基因Col1α1和Col1α2表達水平明顯升高，而PBA可以抑制Col1α1和Col1α2表達的升高。
　　結(jié)論：
　　PBA可能抑制博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化過程中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。