人B7-H4受體及其抗體的研究.pdf

1、B7-H4是一種負(fù)性共刺激分子，是近年來發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員之一。它的作用是通過抑制T細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞因子的分泌來調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。人類的B7-H4屬于I型跨膜蛋白，與其他B7家族成員相比，其胞外部分有20-30％的氨基酸同源性。人類的B7-H4分子定位在人染色體1p11.1，由6個外顯子和5個內(nèi)含子組成，其mRNA在淋巴和非淋巴組織中呈廣泛性表達(dá)，但是由于受到轉(zhuǎn)錄后水平的嚴(yán)格調(diào)控，B7-H4蛋白僅在正常組織中呈現(xiàn)微弱的表達(dá)。

2、最近的研宄表明，B7-H4分子在正常人新鮮分離的T、B淋巴細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞（DCs)和單核細(xì)胞表面均不表達(dá)，但可以被體外活化刺激因子誘導(dǎo)表達(dá)，有報道稱B7-H4分子在乳腺癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、宮頸癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中呈現(xiàn)異常高表達(dá)。這些證據(jù)都表明，B7-H4的表達(dá)在腫瘤微環(huán)境中對腫瘤細(xì)胞逃避機體的免疫監(jiān)視具有重要作用。迄今為止，與 B7-H4相互作用的受體仍未被發(fā)現(xiàn)，但是關(guān)于其受體的研宄是目前免疫學(xué)研宄的熱

3、點之一，其受體的發(fā)現(xiàn)將會幫助我們更進一步的了解B7-H4與其受體相互作用的機制，為臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。本科室利用標(biāo)記有FITC的B7-H4-hFc融合蛋白進行流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，在來源于扁桃體的部分淋巴細(xì)胞上組成性的表達(dá)B7-H4受體，另外在活化T細(xì)胞和肺癌組織、肺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)來源的T細(xì)胞上也表達(dá)B7-H4受體。
　　本研究旨在通過B7-H4-hFc融合蛋白制備親和層析柱，從扁桃體細(xì)胞分離純化 B7-H4受體，并對該受體蛋

4、白進行初步的鑒定，隨后利用所獲得的該受體蛋白對本科室的兩株疑似抗B7-H4受體的單抗進行鑒定。
　　【目的】獲得并檢測B7-H4的受體，利用B7-H4的受體檢測本科室所制備的疑似抗B7-H4受體的單抗。
　　【方法】通過B7-H4-hFc融合蛋白裝柱制備親和層析柱，從扁桃體細(xì)胞分離獲得B7-H4受體蛋白，觀察SDS-PAGE電泳目的條帶位置以及與羊抗人-HRP和羊抗鼠-HRP的反應(yīng)。對所得的抗B7-H4受體的疑似單抗及B7-

5、H4-hFc融合蛋白進行生物素的標(biāo)記，用酶聯(lián)免疫方法ELISA對疑似抗B7-H4受體的單抗進行檢測。
　　【結(jié)果】成功制備結(jié)合B7-H4-hFc的親和層析柱，分離純化的B7-H4受體蛋白進行SDS-PAGE并染色后在170kD上方有條帶，ELISA檢測結(jié)果顯示該B7-H4受體與羊抗人-HRP、羊抗鼠-HRP有反應(yīng)。以該受體蛋白進行包板，用ELISA方法鑒定，顯示單抗10A10與B7-H4受體有陽性反應(yīng)。
　　【結(jié)論】成功分離