不同濃度17β-雌二醇對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠纖維環(huán)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:椎間盤退行性病變是指隨著年齡的增長(zhǎng)，椎間盤各組織發(fā)生的老化退變。是導(dǎo)致許多脊柱退行性疾病的前提和基礎(chǔ)，如椎管狹窄、椎間盤突出、脊柱不穩(wěn)等。雖然目前導(dǎo)致椎間盤退變的確切機(jī)制還不清楚，但大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為椎間盤的退變是多因素共同作用的結(jié)果。椎間盤細(xì)胞數(shù)量的減少以及細(xì)胞外基質(zhì)成分的改變是椎間盤退變的病理生理基礎(chǔ)，而髓核及纖維環(huán)細(xì)胞的凋亡是椎間盤細(xì)胞減少的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)退變的椎間盤組織能夠產(chǎn)生大量的炎癥因子，其中IL-1β是一種能導(dǎo)致炎癥

2、反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的多效性細(xì)胞因子，在椎間盤細(xì)胞凋亡中起重要作用。臨床觀察發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后婦女與同年齡男性相比，椎間盤退行性疾病的發(fā)病率較高，提示雌激素與椎間盤退變有關(guān)。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)雌激素有抗軟骨細(xì)胞及胰腺β細(xì)胞凋亡的作用，雌激素是否有抗椎間盤細(xì)胞凋亡的作用未見(jiàn)報(bào)道。本文的目的是探討17β-雌二醇是否有抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠纖維環(huán)細(xì)胞凋亡的作用及是否有濃度依賴性。
　　方法:酶消化法原代培養(yǎng)大鼠纖維環(huán)細(xì)胞，細(xì)胞貼壁融為單層時(shí)，用0.2

3、5％Ⅱ型膠原酶及0.2％胰酶（含0.02％ EDTA）消化，細(xì)胞傳代至第3代，用不含胎牛血清和酚紅的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，按以下分為六組:(1)組1，空白對(duì)照組;(2)組2，IL-1β誘導(dǎo)組;(3)組3，0.1μ mol/L雌激素組;(4)組4，1μ mol/L雌激素組;(5)組5，10μ mol/L雌激素組;(6)組6，ICI182，780抑制劑組，每組均為6個(gè)樣本。細(xì)胞培養(yǎng)24 h使細(xì)胞生長(zhǎng)同步，加入相應(yīng)藥物培養(yǎng)24h后收獲細(xì)

4、胞。應(yīng)用:(1)倒置顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞形態(tài);(2)流式細(xì)胞術(shù)及Caspase-3活性檢測(cè)細(xì)胞凋亡;(3) MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。
　　結(jié)果:(1)倒置顯微鏡下可見(jiàn)凋亡的纖維環(huán)細(xì)胞萎縮，包膜起泡及細(xì)胞核固縮。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)纖維環(huán)細(xì)胞凋亡率:組1為3.47％±0.25％;組2為18.80％±0.99％;組3為12.97％±0.61％;組4為8.67％±0.74％;組5為6.00％±0.61％;組6為18.57％±0.51％

5、。組1、組2、組5、組6之間細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=237.21，P＜0.001），組5凋亡率低于組2(P＜0.001)和組6(P＜0.001)，組2和組6之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;組1、組2、組3、組4、組5之間細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=474.78，P＜0.001)，組3、組4、組5細(xì)胞凋亡率逐漸下降。Caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果顯示:組2 Caspase-3活性明顯降低，組3、組4、組5 Caspase-3活性逐漸上升

6、，組6 Caspase-3活性降低。(3)細(xì)胞增殖活性:各組OD值（吸光度）:組1為71.31％±1.31％;組2為26.74％±1.85％;組3為42.13％±2.10％;組4為53.68％±2.71％;組5為62.89％±3.12％;組6為32.14％±2.25％。組1、組2、組5、組6之間細(xì)胞增殖活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=340.95，P＜0.001)，組5增殖活性大于組2(P＜0.001)和組6(P＜0.001)，組2和組6之間