桃仁-紅花藥對干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠IVDD細(xì)胞的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的椎間盤退變是椎間盤退變性疾病最根本的病理基礎(chǔ)，多見于中老年患者，隨著人們生活和工作方式的不良改變，該類疾病逐漸趨于年輕化，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。
　　前期研究證實紅花單體羥基紅花黃色素A(Hydroxy saffloweryellow A，HSYA)能夠延緩椎間盤的退變，桃仁、紅花配伍是中醫(yī)最經(jīng)典的藥對，桃仁單體及桃仁-紅花藥對可能存在延緩椎間盤退變的潛能。該實驗研究主要探討桃仁-紅花藥對及各自單體對炎癥誘導(dǎo)的椎間盤軟骨終板

2、細(xì)胞的保護(hù)作用及具體的信號分子機(jī)制，對臨床用藥具有重要的指導(dǎo)意義。
　　方法分離、培養(yǎng)大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞，10ng/mL IL-1β誘導(dǎo)正常大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞建立炎癥退變的細(xì)胞模型，通過細(xì)胞化學(xué)染色，CCK-8檢測細(xì)胞增殖，細(xì)胞免疫熒光，流式分析細(xì)胞凋亡，Real-time PCR檢測基因表達(dá)以及Western blot檢測蛋白表達(dá)等實驗方法研究桃仁-紅花藥對及各自單體具體作用的機(jī)制。
　　結(jié)果實驗表明10ng/mL

3、 IL-1β能夠誘導(dǎo)大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞發(fā)生炎癥退變，不同濃度的HSYA能不同程度的上調(diào)Col2α1、Aggrecan、Sox9 mRNA的表達(dá)，下調(diào)Col10α1、ADAMTS-5、MMP-13 mRNA及炎癥因子IL-1β、IL-6 mRNA的表達(dá)，ERK1/2磷酸化蛋白的表達(dá)在各時間點有著顯著的變化趨勢?？嘈尤受?0-2 mol/L能夠抑制椎間盤軟骨終板細(xì)胞的增殖，流式分析其細(xì)胞凋亡比例明顯增高，一定濃度的苦杏仁苷能夠上調(diào)Agg

4、recan、Col2α1 mRNA的表達(dá)，下調(diào)Col10α1、MMP-13及炎癥因子IL-1β、IL-6 mRNA的表達(dá)，苦杏仁苷10-4 mol/L能夠抑制IL-1β誘導(dǎo)的大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞ERK1/2蛋白的磷酸化。桃仁-紅花藥對含藥血清能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，降低細(xì)胞凋亡，上調(diào)Aggrecan、Col2α1、Sox9 mRNA的表達(dá)，下調(diào)Col10α1、IL-6 mRNA的表達(dá)，同時增加軟骨終板細(xì)胞內(nèi)蛋白多糖的含量、Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)

5、，降低X型膠原蛋白的表達(dá)?？嘈尤受章?lián)合HSYA在上調(diào)Aggrecan、Col2α1 mRNA表達(dá)的同時下調(diào)Col10α1、MMP-13、IL-1β、IL-6mRNA的表達(dá);促進(jìn)Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)增強(qiáng)、X型膠原蛋白的表達(dá)降低。
　　結(jié)論桃仁-紅花藥對及各自單體均能抑制IL-1β誘導(dǎo)大鼠椎間盤軟骨終板細(xì)胞發(fā)生退變，延緩椎間盤退變。作用機(jī)制可能是通過抑制IL-1β下游的級聯(lián)信號分子ERK1/2蛋白的磷酸化實現(xiàn)的?？嘈尤受章?lián)合HSYA的藥