降鈣素對IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞炎性反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：觀察降鈣素（calcitonin, CT）對白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13, MMP-13），II型膠原（collagen type II, Col II）和P38激酶（P38 kinase, P38)及其磷酸化蛋白（p-P38）表達(dá)的影響，探討CT治療OA(osteoarthritis，OA)可能的作用機(jī)

2、制。
　　方法：1實(shí)驗(yàn)中采用胰酶加II型膠原酶雙消化法進(jìn)行軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)。2采用甲苯胺藍(lán)及Col II免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定軟骨細(xì)胞。3將融合后的第二代軟骨細(xì)胞分為3組，空白對照組：給予 DMEM/F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24h15min；IL-1β誘導(dǎo)組：給予含10ng/ml IL-1β的DMEM/F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)誘導(dǎo)15min，繼續(xù)培養(yǎng)24h；CT治療組，先給予含10ng/ml IL-1β的DMEM/F12完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)1

3、5min后，加50ng/ml的CT繼續(xù)培養(yǎng)24h。分別用透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化，用Western blot方法檢測MMP-13，Col II蛋白的表達(dá)及P38、p-P38的蛋白水平，Real-time PCR方法檢測MMP-13，Col II mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1甲苯胺藍(lán)染色：正常軟骨細(xì)胞分泌特征性的酸性糖胺多糖能被甲苯胺藍(lán)染成紫紅色，據(jù)此來鑒定培養(yǎng)的是否為軟骨細(xì)胞。2 Col II免疫細(xì)胞化學(xué)染色法：

4、Col II是軟骨細(xì)胞特異性的分泌物，因此采用Col II免疫細(xì)胞化學(xué)染色證明軟骨細(xì)胞Col II呈陽性表達(dá)，胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。3透射電子顯微鏡觀察各組軟骨細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的變化：與空白對照組相比較，IL-1β誘導(dǎo)組的軟骨細(xì)胞表面的突起和皺褶幾乎消失，細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量空泡，線粒體數(shù)目減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹；而CT治療組比IL-1β誘導(dǎo)組上述變化的程度減輕，但比空白對照組要重。4 MMP-13表達(dá)的情況：與空白對照組相比，IL-1β誘導(dǎo)組的

5、MMP-13表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；CT治療組的MMP-13的表達(dá)也有明顯升高（P<0.05），但與 IL-1β誘導(dǎo)組比較，加入CT后MMP-13的表達(dá)明顯下降（P<0.05）。5 Col II的表達(dá)情況：與空白對照組比較，IL-1β誘導(dǎo)組和CT治療組的Col II表達(dá)均明顯降低（P<0.05）；但是CT治療組與IL-1β誘導(dǎo)組的Col II的表達(dá)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6 P38及 p-P38的蛋白水平：各組的P38的蛋白水