基于斑馬魚模型評(píng)價(jià)柴胡協(xié)同索拉非尼抗肝細(xì)胞癌的功效.pdf

1、目的：肝癌是嚴(yán)重危害人類健康的全球性腫瘤，柴胡為疏肝解郁之要藥，加之作為經(jīng)典的歸肝經(jīng)藥物，臨床上被廣泛用于肝癌的治療。本研究提出柴胡具有靶向性以“修飾”抗肝癌藥物，將其運(yùn)送至腫瘤部位，以提高治療效果的這一假說，選擇TG品系fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以體視熒光顯微鏡為主要觀察工具，客觀、系統(tǒng)而直接地評(píng)價(jià)柴胡協(xié)同索拉非尼抗HCC的功效，進(jìn)而驗(yàn)證我們提出的假說的可能性，為柴胡在臨床上應(yīng)用于肝癌的治療提供客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、>　　方法：通過體視顯微鏡(明場)和體視熒光顯微鏡分別觀察22hpf轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型胚胎的血管表型來評(píng)價(jià)柴胡抑制新生血管生成的作用；記錄2dpf野生型斑馬魚胚胎暴露于不同濃度梯度柴胡水提物的死亡數(shù)，擬合LC50、LC10，估算MNLC，評(píng)估柴胡水提物的急性毒性；構(gòu)建高表達(dá)熒光素酶的HepG2穩(wěn)轉(zhuǎn)株，通過裸鼠驗(yàn)證其成瘤性，通過顯微注射將CM-Dil試劑染色的穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射入2dpf的轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎的卵黃囊內(nèi)，立即評(píng)估人肝癌轉(zhuǎn)基因斑馬魚卵黃囊

3、移植瘤模型是否成功建立；通過體視顯微鏡和體視熒光顯微鏡觀察，定量分析并評(píng)價(jià)柴胡協(xié)同索拉非尼抑制轉(zhuǎn)基因斑馬魚HCC移植瘤生長的功效。
　　結(jié)果:柴胡對(duì)轉(zhuǎn)基因斑馬魚新生血管的生成無抑制作用；柴胡水提物致野生型斑馬魚胚胎的死亡率呈明顯的濃度依賴關(guān)系，柴胡水提物對(duì)斑馬魚胚胎72h-LC50為670μg/ml、72h-LC10為205μg/ml、72h-MNLC為155μg/ml，柴胡水提物對(duì)斑馬魚胚胎及幼魚的急性毒性較輕；確定了人肝癌轉(zhuǎn)基