MiR-218靶向調(diào)控緊密連接蛋白Cldn-2在HK-2細胞缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　探討miR-218調(diào)控緊密連接蛋白Claudin-2（cldn-2）在人腎小管上皮細胞（HK-2）缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)過程中的作用。
　　方法：
　　HK-2細胞作為研究對象，用抗霉素A、A23187及2-脫氧葡萄糖誘導體外培養(yǎng)的HK-2細胞缺血再灌注損傷，來模擬體內(nèi)腎小管上皮細胞缺血再灌注損傷狀態(tài)，構(gòu)建細胞缺血再灌注損傷模型。
　　第一部分

2、：實驗分組：①正常對照組（C組）、②缺血再灌注組（I/R組）（根據(jù)再灌注的時間點分為5個亞組：0h，8h，12h，24h，48h，檢測HK-2細胞缺血再灌注損傷過程中細胞凋亡、細胞活性及
　　miR-218、cldn-2的動態(tài)變化。
　　第二部分：分別予miR-218模擬物、抑制物和無意義RNA轉(zhuǎn)染HK-2細胞，然后給予細胞缺血再灌注損傷，依據(jù)第一部分實驗研究結(jié)果得到的細胞凋亡率最高點（再灌注12h）為本部分實驗研究的時間點

3、，實驗分組：①模型組（I/R-12h組）、②miR-218模擬物干預組（mimics 組）、③miR-218抑制物干預組（inhibitor組）、④模擬物無意義miR干預組（mimics-NC組）、⑤抑制物無意義miR干預組（inhibitor-NC組）。檢測各組細胞凋亡率、細胞活性及cldn-2表達水平。
　　結(jié)果：
　　第一部分：HK-2細胞缺血再灌注損傷后，在再灌注12h，細胞凋亡率最高[（63.24±4.2

4、9）％]，細胞活性最低(0.11±0.03)（P＜0.05）；miR-218表達水平與損傷后細胞的凋亡率及細胞活性密切相關，再灌注12h細胞miR-218表達水平達高峰，為基線值的6.44倍（P＜0.05）；cldn-2 mRNA及蛋白質(zhì)的表達水平與 miR-218表達水平相平行，在HK-2細胞缺血再灌注后12h， cldn-2 mRNA降至最低值，下降（3.06±0.16）倍， cldn-2蛋白質(zhì)相對表達水平降至最低點，為（0.13±

5、0.01）（P＜0.05）。
　　第二部分：轉(zhuǎn)染干預后，mimics組 miR-218表達水平明顯升高，為基線值的1450倍，與I/R-12h組比較，mimics組細胞凋亡率進一步加重[（80.18±4.23）%]，細胞活力進一步降低（0.05±0.01）（P＜0.05），cldn-2 mRNA下降倍數(shù)增多，下降（3.62±0.14）倍，cldn-2蛋白相對表達水平（0.09±0.01）降低（P＜0.05）。與I/R-12h組相比

6、， inhibitor組細胞凋亡率減少[（51.22±3.21）%]，細胞活性（0.18±0.02）升高（P＜0.05），cldn-2 mRNA下降倍數(shù)減少，下降（1.59±0.03）倍，cldn-2蛋白相對表達水平（0.29±0.02）增高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　MiR-218靶向抑制cldn-2的mRNA及蛋白質(zhì)的表達而介導HK-2 細胞缺血再灌注損傷，抑制miR-218減輕HK-2細胞缺血再灌注損