金魚SG2NA和Striatin基因的分子克隆及其發(fā)育表達(dá)分析.pdf

1、以金魚為模式動(dòng)物，應(yīng)用RT—PCR結(jié)合RACE，從金魚腦組織克隆了SG2NA和Striatin基因cDNA全長(zhǎng)。序列分析顯示，金魚中SG2NA和Striatin基因與人類等其它物種，有著很高的相似性，并且存在相同的功能基序。分析此兩基因的序列及后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)，在金魚中，兩基因mRNA均存在全新的選擇性剪接變體形式，分別為30bp和27bp的核苷酸序列可變剪接所致，由此造成了10aa和9aa的氨基酸序列的丟失或改變。對(duì)此兩剪接區(qū)域的初步

2、分析發(fā)現(xiàn)，可變剪接可能造成了磷酸化位點(diǎn)的丟失，和蛋白激酶或磷酸酶綁定位點(diǎn)的改變。此兩變體形式的存在，或構(gòu)成了一種重要的功能調(diào)控機(jī)制。 隨后，應(yīng)用RT—PCR和Western blotting方法，初步分析了在金魚成體不同組織、胚胎發(fā)育不同時(shí)期，以及金魚和小鼠眼睛四組織中，SG2NA的表達(dá)模式。發(fā)現(xiàn)，無論是在mRNA水平還是在蛋白質(zhì)水平，成體各組織及胚胎發(fā)育不同時(shí)期間的表達(dá)均存在不同程度的差異，特別是伴隨胚胎發(fā)育的進(jìn)程，SG2N

3、A在蛋白水平和mRNA水平都有很大的波動(dòng)，預(yù)示其在胚胎發(fā)育過程中受到了嚴(yán)格的調(diào)控。結(jié)合Striatin家族低等生物中同源基因的已報(bào)道功能，推測(cè)，其可能在金魚的胚胎發(fā)育及組織分化的過程中起重要作用。在金魚和小鼠眼睛四組織的表達(dá)中，其組織間存在的較大差異，可能與眼組織細(xì)胞分化及參與特定細(xì)胞的功能相關(guān)。同時(shí)，金魚和小鼠間存在的物種差異，推測(cè)是該基因家族在物種進(jìn)化過程中，對(duì)于基因功能的差異選擇中形成的。此外，在培養(yǎng)的人癌和眼睛神經(jīng)細(xì)胞系中，對(duì)此