MEK-ERK抑制劑U0126對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響.pdf

1、目的:探討U0126對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的影響及其機(jī)制。
　　方法:將不同濃度MEK/ERK抑制劑U0126（25、50、100μmol/L）處理Tca8113細(xì)胞24h、48h、72h后，MTT法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的抑制情況;劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;細(xì)胞免疫熒光染色和Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MEKK1、p-MEKK1在細(xì)

2、胞內(nèi)定位及蛋白的表達(dá);Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-cadherin及vimentin的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.MTT檢測(cè)結(jié)果示，25、50和100μmol/L U0126刺激細(xì)胞24、48、72h后，與對(duì)照組比較對(duì)細(xì)胞增殖均具有明顯的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05）;U0126作用細(xì)胞24、48和72h時(shí)，50和100μmol/L組與25μmol/L組比較對(duì)細(xì)胞增殖均具有明顯的抑制（P＜0.0

3、1或P＜0.05）;U0126處理細(xì)胞24、48和72h時(shí)，100μmol/L組與50μmol/L組比較對(duì)細(xì)胞增殖的抑制顯著（P＜0.01）;表現(xiàn)出濃度依賴(lài)性。25、50和100μmol/L U0126刺激細(xì)胞后，48和72h組與24h組比較對(duì)細(xì)胞增殖具有明顯的抑制（P＜0.01）;72h與48h組比較對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用顯著(P＜0.01);表現(xiàn)出的時(shí)間依賴(lài)性。
　　2.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，25、50、100μmol/LU0126刺

4、激Tca8113細(xì)胞24、48、72h后，細(xì)胞向劃痕內(nèi)遷移的距離與對(duì)照組比較受到明顯抑制（P＜0.01）。
　　3.Transwell檢測(cè)結(jié)果顯示，25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細(xì)胞48h后，與對(duì)照組比較，自上室侵襲穿過(guò)基質(zhì)膠進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)目減少，相對(duì)侵襲率分別為79％、51％、35％(P＜0.01)，表現(xiàn)出濃度依賴(lài)性。
　　4.免疫熒光檢測(cè)顯示，MEKK1主要定位在細(xì)胞質(zhì)，p-MEKK1主要定

5、位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核膜，ERK1/2定位在細(xì)胞質(zhì)和核膜，p-ERK1/2主要定位在細(xì)胞核膜和核內(nèi);25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細(xì)胞48h后，隨著藥物濃度的增加，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)p-ERK1/2的熒光密度逐漸降低，呈現(xiàn)出濃度依賴(lài)性，而ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1的熒光密度沒(méi)有明顯變化。
　　5.Western blot實(shí)驗(yàn)顯示:25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細(xì)胞48h后

6、，與對(duì)照組比較，U0126對(duì)p-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯抑制(P＜0.01);而對(duì)ERK1/2、p-MEKK1、MEKK1蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯抑制作用。
　　6.Western blot實(shí)驗(yàn)顯示:25、50、100μmol/LU0126處理Tca8113細(xì)胞48h后，與對(duì)照組比較E-cadherin蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01)，而Vimentin蛋白表達(dá)明顯減弱(P＜0.01)，均呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。
　　結(jié)論:1.U0126明