得克隆對MCF-7細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的影響.pdf

1、得克隆(Dechlorane Plus，DP)是一種使用量巨大、廣泛地存在于各種環(huán)境和生物介質(zhì)、具有生物富集性的氯代阻燃劑。DP的毒理效應(yīng)及作用機(jī)制研究非常有限。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，DP可誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖，并對雌激素受體及MAPK/ERK通路相關(guān)基因的表達(dá)產(chǎn)生影響。本論文采用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，對DP暴露后的MCF-7細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜進(jìn)行分析，進(jìn)一步挖掘DP毒性效應(yīng)及內(nèi)分泌干擾作用的可能分子機(jī)制，為DP生物毒性和生態(tài)

2、風(fēng)險的評價提供科學(xué)依據(jù)。
　　差異蛋白質(zhì)組分析表明，10-6M DP暴露處理96小時后的MCF-7細(xì)胞與對照組相比，蛋白表達(dá)譜發(fā)生明顯改變，共獲得52個差異表達(dá)（≥1.5倍）的蛋白點(diǎn)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析后，共23個蛋白點(diǎn)具有顯著性差異(p≤0.05)。其中，表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)14個，表達(dá)下調(diào)的蛋白點(diǎn)9個。選取上述23個蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOFMS/MS串聯(lián)質(zhì)譜分析，鑒定出其中的10個蛋白點(diǎn)。這些蛋白點(diǎn)分別為熱休克蛋白27和60、堿性肌

3、球蛋白輕鏈的兩個異構(gòu)體、核糖核苷二磷酸激酶B、60S酸性核糖體蛋白P2、肽酰脯氨基順反異構(gòu)酶A、前纖維蛋白-1、鳥嘌呤核苷酸交換因子5和原鈣黏蛋白α9前體。進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析顯示這10個蛋白主要參與了細(xì)胞過程、生物學(xué)調(diào)控、對外源刺激的響應(yīng)、代謝和發(fā)育過程、以及信號和免疫等生物學(xué)過程。選取熱休克蛋白60進(jìn)行了mRNA和蛋白水平的定量分析，其在DP暴露處理后的變化趨勢與蛋白質(zhì)組分析的結(jié)果一致，說明本研究發(fā)現(xiàn)的差異表達(dá)蛋白質(zhì)可用于后續(xù)DP