Pokemon對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響及Pokemon基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、紅髓生成因子(POKerythroidmyeloidontogenicfactor，Pokemon)是一種新近發(fā)現(xiàn)的在多種腫瘤中高表達(dá)的原癌基因，可以抑制抑癌基因ARF的表達(dá)。 本課題的目的在于研究Pokemon對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖的影響，探究Pokemon基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)制。構(gòu)建Pokemon表達(dá)質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染到MCF-7細(xì)胞中，通過MTT、平板克隆形成能力實(shí)驗(yàn)觀察到Pokemon可以促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖。構(gòu)建一系列

2、不同長度的Pokemon啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體，分別轉(zhuǎn)染這幾種報(bào)告基因載體到HepG-2和293T細(xì)胞中，通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法確定了Pokemon基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1000bp為Pokemon啟動(dòng)子的核心調(diào)控區(qū)域。利用TFSEARCH程序發(fā)現(xiàn)Pokemon啟動(dòng)子的核心調(diào)控區(qū)域上存在兩個(gè)GC-box的順式作用因子，通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)法、突變分析證明這兩個(gè)GC-box對(duì)Pokemon啟動(dòng)子活性起重要的作用。而Sp1是G