MIF調(diào)控MCF-7細(xì)胞增殖和遷移侵襲能力及血管生成因子表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(Macrophage migration Inhibitory Factor，MIF)表達(dá)水平對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞系增殖和遷移、侵襲能力的影響并探討其機(jī)制，構(gòu)建BALB/c鼠移植瘤模型，探究MIF表達(dá)水平對(duì)BALB/c鼠移植瘤增殖能力和血管生成因子表達(dá)水平的影響及機(jī)制。
　　方法：
　　1.Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測(cè)敲低MIF后MCF-7細(xì)胞增殖活力

2、，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期情況，Western blot法檢測(cè)敲低MIF后MCF-7細(xì)胞Cyclin D1蛋白表達(dá)水平。
　　2.劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低MIF對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，Western blot法檢測(cè)MMP14蛋白表達(dá)水平。
　　3.Western blot法檢測(cè)下調(diào)因子MIF后，MAPK信號(hào)通路中P38、ERK蛋白磷酸化的情況。
　　4.構(gòu)建BALB/c裸小鼠移植瘤模型，測(cè)量

3、腫瘤的體積、繪制腫瘤的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。
　　5.Western blot法檢測(cè)BALB/c鼠移植瘤組織MIF、p-P38和p-ERK蛋白的表達(dá)情況。
　　6.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)敲低MIF后裸鼠移植瘤組織CD31和D2-40表達(dá)水平，進(jìn)而評(píng)價(jià)微血管和微淋巴管數(shù)量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,Real-

4、time PCR）檢測(cè)BALB/c鼠移植瘤組織VEGF-A和VEGF-C的轉(zhuǎn)錄水平，Western blot法檢測(cè)VEGF-A和VEGF-C的蛋白翻譯水平。
　　結(jié)果：
　　1.siRNA有效阻斷MCF-7乳腺癌細(xì)胞系MIF基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯后，細(xì)胞活力受到抑制，細(xì)胞周期停滯在G1-S期，Cyclin D1蛋白的表達(dá)水平也較MCF-7細(xì)胞有所下降。
　　2.MIF表達(dá)降低的MCF-7乳腺癌細(xì)胞系穿過(guò)基底膜（無(wú)基質(zhì)膠或有基

5、質(zhì)膠）的細(xì)胞數(shù)減少，MMP14蛋白表達(dá)水平也隨之下降。
　　3.低表達(dá)MIF的MCF-7細(xì)胞同時(shí)也降低MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上p-P38和p-ERK蛋白的磷酸化水平。4.用穩(wěn)定低表達(dá)MIF的MCF-7細(xì)胞,建立的BALB/c鼠移植瘤模型與MCF-7乳腺癌細(xì)胞系建立的移植瘤模型相比較，前者移植瘤的生長(zhǎng)較慢，體積較小。
　　5.對(duì)低表達(dá)MIF細(xì)胞建立的BALB/c鼠移植瘤模型p-P38和p-ERK蛋白的磷酸化水平下降。