OTUD7B對乳腺癌細胞增殖、遷移、凋亡及血管內皮生長因子表達的影響.pdf

1、目的：乳腺癌對世界女性造成的身心傷害早已不容樂觀。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是由多基因、多通路、多反應相互作用的結果，其發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。腫瘤的增殖速率、發(fā)生轉移及轉移部位不同直接影響著乳腺癌患者的生存期。近年來乳腺癌患者的發(fā)病年齡趨向于年輕化，發(fā)生侵襲、轉移的機率大大增加，導致許多患者就診時已經(jīng)失去了手術時機，直接影響著患者總生存期。所以抑制腫瘤的生長、阻斷腫瘤的轉移，對提高患者的生存率、改善生活質量發(fā)揮著至關重要的作用。然而

2、腫瘤血管生成是引發(fā)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移的根本源頭，所以抑制乳腺癌細胞的血管生成對治療乳腺癌具有極其重大的意義。其中核因子-KappaB（NF-κB）可調節(jié)血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達，而去泛素化酶對于NF-κB的調節(jié)至關重要。有研究發(fā)現(xiàn)NF-κB不僅能夠在胃癌、甲狀腺癌、乳腺癌中促進VEGF的表達，還能夠促進淋巴結的轉移。去泛素化酶OTUD7B能夠阻止NF-

3、κB激活，而NF-κB能夠調節(jié)癌細胞遷移、侵襲、血管內皮生長因子的表達等。所以明確去泛素化酶OTUD7B與乳腺癌細胞增殖、遷移、凋亡及VEGF表達之間的關系，可能為治療乳腺癌提供新的方法。
　　方法：構建慢病毒小干擾RNA沉默載體（LV3-si-hOTUD7B）及對照載體（LV3-NC），構建帶有綠色熒光蛋白標簽的人OTUD7B表達質粒（pEGFP-hOTUD7B）及對照質粒（pEGFP-CI）。用包含LV3-si-hOTUD7B

4、、LV3-NC、pEGFP-hOTUD7B、pEGFP-CI慢病毒液分別感染MCF-7細胞。MTS法檢測OTUD7B對MCF-7細胞增殖的影響；細胞劃痕實驗評價OTUD7B對MCF-7細胞遷移能力的影響；流式細胞術PI染色法檢測OTUD7B對MCF-7細胞周期的影響；蛋白質印跡法（Western blot）檢測OTUD7B對MCF-7細胞細胞質NF-κBP65和細胞核NF-κBP65的表達水平的調節(jié)；RT-PCR檢測OTUD7B對VEG

5、F mRNA的相對表達水平的影響；ELISA檢測OTUD7B對MCF-7乳腺癌細胞分泌VEGF的調節(jié)。應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（-x±s）表示，均數(shù)比較采用t檢驗或單因素方差分析（One-way ANOVA），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:通過MTS法檢測細胞增殖顯示，轉染pEGFP-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細胞增殖受到抑制，轉染LV3-si-hOTUD7B后，MCF-

6、7乳腺癌細胞增殖得到促進。細胞劃痕實驗表明，轉染pEGFP-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細胞遷移受到抑制，轉染LV3-si-hOTUD7B后，MCF-7乳腺癌細胞遷移能力升高。流式細胞術PI染色檢測細胞周期結果提示pEGFP-hOTUD7B可調節(jié)MCF-7細胞周期阻滯在G1期。Western blot結果分析顯示，與陰性對照組及正常對照組相比，pEGFP-hOTUD7B能夠下調MCF-7乳腺癌細胞核蛋白NF-κBP65的表達水平，

7、而細胞質內NF-κBP65卻無明顯差異。RT-PCR結果提示，在mRNA水平，pEGFP-hOTUD7B抑制了VEGF的表達。ELISA法檢測MCF-7細胞條件培養(yǎng)基中的VEGF含量結果顯示，與陰性對照組及正常對照組相比，pEGFP-hOTUD7B組條件培養(yǎng)基中VEGF含量低。
　　結論：OTUD7B能夠抑制MCF-7乳腺癌細胞增殖、遷移能力，可調節(jié)MCF-7乳腺癌細胞阻滯于G1期，同時還可抑制MCF-7乳腺癌細胞對VEGF的表達