Lin-4和環(huán)狀RNA在渦蟲(chóng)干細(xì)胞中相關(guān)功能研究.pdf

1、渦蟲(chóng)是扁形動(dòng)物門，渦蟲(chóng)綱、兩側(cè)對(duì)稱的真后生動(dòng)物。渦蟲(chóng)具有極強(qiáng)的再生能力，這主要是因?yàn)樗w內(nèi)具有被稱為副胚層（neoblasts）的成體多能干細(xì)胞群，當(dāng)渦蟲(chóng)受到損傷時(shí)，副胚層就可以分化成相應(yīng)的器官或組織。渦蟲(chóng)已成為研究機(jī)體修復(fù)、再生及干細(xì)胞體分子機(jī)理的模式生物之一。
　　microRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)約21-25nt的非編碼小RNA分子，通過(guò)與靶基因互補(bǔ)結(jié)合來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，在發(fā)育、分化、增殖、凋亡、腫瘤形成、新陳代謝及疾病發(fā)

2、生等多種生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。lin-4是1993年在秀麗新小桿線蟲(chóng)中被發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)miRNA，并對(duì)蟲(chóng)體的發(fā)育起重要的調(diào)控作用。Lin-4在哺乳動(dòng)物中的同源序列被命名為miR-125，研究發(fā)現(xiàn)miR-125對(duì)干細(xì)胞的增殖和分化具有重要的調(diào)控作用。在本實(shí)驗(yàn)室對(duì)渦蟲(chóng)再生研究中發(fā)現(xiàn)，lin-4在再生渦蟲(chóng)中表達(dá)差異顯著，并對(duì)渦蟲(chóng)的再生起重要調(diào)控作用。
　　在本研究中，我們研究了日本三角渦蟲(chóng)處于再生狀態(tài)時(shí)， lin-4所參與的調(diào)控作用。從

3、表達(dá)（時(shí)間、空間表達(dá)譜）和功能（調(diào)控機(jī)制）2個(gè)方面來(lái)研究l i n-4及其靶基因在渦蟲(chóng)再生過(guò)程中的功能和作用。通過(guò)合成 lin-4反義寡核苷酸，顯微注射至渦蟲(chóng)體內(nèi)進(jìn)行RNA干擾并利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)lin-4及其靶基因的表達(dá)量變化，進(jìn)而分析靶基因的功能。通過(guò)原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè) lin-4及其靶基因在日本三角渦蟲(chóng)不同再生過(guò)程中的空間分布。結(jié)果顯示：lin-4及其靶基因在渦蟲(chóng)再生中表達(dá)差異顯著，其分布和副胚層干細(xì)胞的分布基本吻合，且都趨于傷

4、口處表達(dá)，并且在12h和72h時(shí)表達(dá)差異最明顯。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)lin-4及其靶基因在渦蟲(chóng)再生過(guò)程中很可能參與副胚層的形成，在全身性細(xì)胞分裂期和由傷口誘導(dǎo)的細(xì)胞分裂期起重要調(diào)控作用。
　　本研究還通過(guò)高通量測(cè)序分析，得到再生渦蟲(chóng)的7條環(huán)狀RNA，而環(huán)狀RNA的miRNA結(jié)合位點(diǎn)分析表明預(yù)測(cè)的其中一條環(huán)狀RNA和lin-4存在結(jié)合位點(diǎn)，因此推測(cè)該環(huán)狀RNA有可能通過(guò)調(diào)節(jié)lin-4對(duì)其靶基因的調(diào)控，進(jìn)而在渦蟲(chóng)的再生過(guò)程中起重要作用。<