肝細(xì)胞癌相關(guān)環(huán)狀RNA的鑒定及其臨床意義分析.pdf

1、目的：
　　在我國，肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一種高發(fā)病率、低生存率的惡性腫瘤之一。大約70％的HCC患者發(fā)現(xiàn)時多處于中晚期，失去了外科手術(shù)、射頻消融等根治性治療的機(jī)會。因此，如何做到對 HCC的早發(fā)現(xiàn)、早診斷依舊是臨床醫(yī)生面臨的難題。與其他腫瘤相似，基因的表達(dá)異常參與了 HCC的發(fā)生發(fā)展。近些年來，隨著高通量測序方法的進(jìn)步，非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA）在腫瘤

2、發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的作用吸引了越來越多醫(yī)學(xué)研究者的青睞。最近，環(huán)狀 RNA（circular RNA，circRNA）作為一種古老的ncRNA分子重新走入研究者們的視野，并且發(fā)現(xiàn)它們與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密不可分的聯(lián)系，但是它們與 HCC之間的相關(guān)性研究甚少。因此，發(fā)現(xiàn)并鑒定與 HCC相關(guān)的circRNA對于我們提高對 HCC發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識將具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究擬先揭示 HCC相關(guān) circRNA的表達(dá)譜，并在此基礎(chǔ)上探索代表性 c

3、ircRNA在HCC診斷中潛在的臨床價值。
　　方法：
　　1.利用circRNA表達(dá)芯片，獲得 HCC相關(guān) circRNA表達(dá)譜。
　　2.收集63例 HCC患者的癌組織與對應(yīng)的癌旁組織，42例慢性乙型肝炎患者肝組織標(biāo)本。
　　3.生物信息學(xué)預(yù)測與 hsa_circ_0003570相互作用的微小 RNA（microRNA，miRNA）及信使RNA（message RNA，mRNA）分子。
　　4.應(yīng)用實(shí)時

4、定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測HCC組織、癌旁組織、肝硬化組織、慢性乙型肝炎組織及HCC細(xì)胞株中hsa_circ_0003570的水平，并以克隆測序技術(shù)證實(shí)hsa_circ_0003570的存在。
　　5.分析 hsa_circ_0003570表達(dá)水平與 HCC患者臨床病理因素的相關(guān)性，揭示其

5、可能的HCC診斷價值。
　　結(jié)果：
　　1.首次揭示了HCC相關(guān)circRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)高達(dá)525種 circRNA在 HCC組織和癌旁組織中表達(dá)差異超過2倍，其中在 HCC組織中高表達(dá)和低表達(dá)的分別有173和352種。
　　2.經(jīng)擴(kuò)大標(biāo)本量，采用qRT-PCR重點(diǎn)檢測了代表性circRNA——hsa_circ_0003570與HCC的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0003570在HCC組織中低表達(dá)；尤其重要的是，它在

6、慢性乙型肝炎組織、肝硬化組織及HCC組織中的表達(dá)量呈階段性遞減表達(dá)特征。
　　3.進(jìn)一步細(xì)胞水平研究發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_0003570在正常肝細(xì)胞L02，非轉(zhuǎn)移潛能HCC細(xì)胞株HepG2，低轉(zhuǎn)移潛能HCC細(xì)胞株MHCC97L和SMMC-7721，高轉(zhuǎn)移潛能HCC細(xì)胞株MHCC97H和HCCLM3中的表達(dá)水平呈顯著性差異。
　　4.綜合分析發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_0003570通過基于miR-328、miR-185-3p、

7、miR-138-5p和miR-342-5p等的競爭性內(nèi)源RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）影響HCC的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。
　　5.為探討 circRNA與 HCC的關(guān)系，還發(fā)現(xiàn)另外2種 circRNA與 HCC相關(guān)：hsa_circ_0005986與HCC的巴塞羅那分期標(biāo)準(zhǔn)（Barcelona clinic liver cancer staging system，BCLC）和轉(zhuǎn)移相關(guān)；hsa_cir

8、c_0003258在癌組織中較癌旁組織明顯低表達(dá)，與芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　本研究系統(tǒng)揭示了HCC相關(guān)circRNA表達(dá)譜；通過檢測3種代表性的circRNA（hsa_circ_0003570、hsa_circ_0005986和 hsa_circ_0003258）在 H C C組織及細(xì)胞中的表達(dá)水平，說明它們在 HCC的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮作用，并且具有一定的診斷價值，有望成為一類新型 HCC標(biāo)記物。鑒于 circ