長非編碼RNA基因Z38對人乳腺癌細胞BT549生物學特性的影響.pdf

1、長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，lncRNA)可以通過多種機理在DNA的結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)的表達、構(gòu)象和功能上起到極為重要的調(diào)控作用，進而在細胞、組織和個體水平上產(chǎn)生重要影響。實驗室前期的研究發(fā)現(xiàn)了一個重要的lncRNA基因:Z38。研究表明，Z38在乳腺癌組織中高表達，而癌旁乳腺組織表達低。
　　本文以Z38基因為對象，探究干擾Z38基因?qū)θ巳橄侔┘毎鸅T549生物學特性的影響。主要在細胞水平和動物水平

2、上進行研究，具體展開了以下工作:
　　(1)向BT549細胞轉(zhuǎn)染干擾Z38表達的慢病毒，經(jīng)嘌呤霉素篩選，獲得了穩(wěn)定干擾的細胞，并采用RT-PCR技術(shù)檢測Z38的表達水平，結(jié)果表明慢病毒感染效率接近100％。
　　(2)通過MTT法檢測Z38基因?qū)T549細胞增殖活力及化療藥物敏感性的影響，并通過單克隆法檢測Z38基因?qū)毎湫纬赡芰Φ挠绊憽＝Y(jié)果顯示干擾Z38基因表達后，MTT檢測BT549細胞的的OD(optical d

3、ensity)值有明顯下降，即細胞活力降低，經(jīng)化療藥物阿霉素處理細胞，其存活率也大大降低。
　　(3)對Z38基因表達干擾前后的BT549細胞進行細胞周期的分析，發(fā)現(xiàn)Z38基因的沉默能夠顯著地阻礙腫瘤細胞的周期分裂行為，阻滯行為主要發(fā)生在細胞分裂間期中S期向G2期的轉(zhuǎn)變中。
　　(4)對Z38表達沉默的BT549細胞進行流式檢測，比較干擾前后腫瘤細胞中CD44+/CD24-細胞群的數(shù)量差異，結(jié)果顯示，干擾Z38基因的表達后，

4、細胞中具有干細胞特性的CD44+/CD24-細胞群數(shù)量占總細胞的比例明顯的減少了，推測其細胞的干性也將隨之大大降低。
　　(5)裸鼠成瘤實驗用來檢測Z38基因在體內(nèi)表達差異對腫瘤的影響。通過對裸鼠成瘤體積與重量的測量，評估Z38基因?qū)T549細胞成瘤能力的影響。結(jié)果顯示干擾Z38表達較大幅度的降低了BT549細胞的腫瘤增殖能力及成瘤能力。
　　本次實驗所獲得的結(jié)果皆與我們的假設一致，而且與前期的研究結(jié)果支持著同樣一個結(jié)論: