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文檔簡介
1、背景:miRNAs是一類小分子內(nèi)源性單鏈非編碼RNA,它通過與靶mRNA完全或不完全的互補(bǔ)結(jié)合,從而促進(jìn)靶mRNA降解或抑制轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá),而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用。微小RNA-10b(miR-10b)作為miRNAs家族中的一員,參與多種腫瘤的生物學(xué)過程,其在乳腺癌中的生物學(xué)特性一直備受爭議。人三陰性乳腺癌是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及表皮生長因子受體2(Her-2)均表達(dá)缺失的乳腺癌,具有高侵襲性、組織學(xué)分級較高、預(yù)后
2、較差和靶向治療無效等特點(diǎn)。為明確miR-10b在人三陰性乳腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)特性,本研究選取具有人三陰性乳腺癌特性的MDA-MB-231細(xì)胞為標(biāo)本,探討miR-10b沉默對其增殖、凋亡、侵襲和遷移及靶基因TIAM1表達(dá)的影響。
目的:探討miR-10b沉默對人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并探討其對靶基因TIAM1表達(dá)的影響。
方法:1、用人工合成的miR-10b inhibitor瞬時轉(zhuǎn)染M
3、DA-MB-231細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組(IN組),同時設(shè)空白細(xì)胞組(Cell組)為空白對照,無義序列轉(zhuǎn)染組(NC組)為陰性對照。轉(zhuǎn)染48h后,實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)檢測各組細(xì)胞miR-10b的表達(dá),以檢測沉默效果。
2、CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)分析轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移能力變化。
3、Real-time PCR和Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后各
4、組細(xì)胞TIAM1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:1、Real-time PCR結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miR-10b inhibitor后,與對照組相比,miR-10b的相對表達(dá)量明顯下調(diào),表明成功沉默miR-10b的表達(dá)。
2、CCK-8法檢測結(jié)果表明:miR-10b沉默后,48h和72h增殖率均明顯上調(diào)(P<0.01),增殖效應(yīng)在48h之后出現(xiàn),并一直維持到72h。
3、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明:miR-10b沉默
5、后,早期和晚期細(xì)胞凋亡比例分別1.77%和1.61%,均明顯下調(diào)(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
4、Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:轉(zhuǎn)染48h后,穿過基質(zhì)膜的侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)分別為(212.17±13.57)個和(322.67±8.62)個,均明顯上調(diào)(P<0.01)。
5、Real-time PCR和Western blot法結(jié)果顯示:TIAM1基因在mRNA水平變化不大(P>0.05),在蛋白水平
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