蘇氨酸、異亮氨酸立體異構(gòu)體的手性色譜分離及其在哺乳動(dòng)物體內(nèi)分布的研究.pdf

1、近十年來(lái)，有關(guān)D一絲氨酸和D一天門冬氨酸的存在、分布和重要的生理作用被廣泛和深入地研究，此外大約1O種其它的D一型氨基酸也被發(fā)現(xiàn)存在于各種動(dòng)物體內(nèi)，其生理作用的研究也正在進(jìn)行中。但已被報(bào)道的這些存在于動(dòng)物體內(nèi)的D一型氨基酸，都只有一個(gè)手性中心，一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體，而八個(gè)必需氨基酸中蘇氨酸和異亮氨酸都有兩個(gè)手性中心，四個(gè)立體異構(gòu)體(兩對(duì)對(duì)映異構(gòu)體)。為了研究哺乳動(dòng)物體內(nèi)蘇氨酸和異亮氨酸的四個(gè)立體異構(gòu)體的分布，本文分別建立了二維液相色譜法分離、

2、分析蘇氨酸的四個(gè)立體異構(gòu)體和柱前手性衍生化一反相高效液相色譜法分離、分析異亮氨酸的四個(gè)立體異構(gòu)體。 蘇氨酸立體異構(gòu)體的分析方法包括：(1)用4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxdiazole(NBD-F)將氨基酸衍生化；(2)用反相高效液相色譜法分離出蘇氨酸和異蘇氨酸衍生物(NBD-Thr，NBD-allo-Thr)；(3)再用手性固定相色譜分離D一蘇氨酸和L一蘇氨酸衍生物(NBD-D-Thr，NBD-L-

3、Thr)以及D一異蘇氨酸和L一異蘇氨酸衍生物(NBD-D-allo-Thr，NBD-L-allo-Thr)；并用熒光檢測(cè)器檢測(cè)。對(duì)該分析方法的線性關(guān)系考查結(jié)果顯示，D一蘇氨酸、D一異蘇氨酸和L一異蘇氨酸在0．0025．5pmol的范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)均為1．000；L一蘇氨酸在0．05-50pmol的范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)也為1．000。對(duì)生物樣品進(jìn)行定量分析的日內(nèi)及曰間精密度大約5％。用此方法對(duì)大鼠體內(nèi)12種組織和體液中蘇氨酸異構(gòu)體的分布進(jìn)行了

4、研究，結(jié)果在尿樣和前腦組織中發(fā)現(xiàn)除L一蘇氨酸外(L-Thr)，D一蘇氨酸(D-Thr)和D一異蘇氨酸(D-allo-Thr)也同時(shí)存在，且D一異蘇氨酸(D-allo-Thr)的濃度高于D一蘇氨酸(D-Thr)，組織和體液中均未檢測(cè)到L一異蘇氨酸(L-allo-Thr)。在正常人的尿液中也檢測(cè)到D一蘇氨酸(D-Thr)(1．33+0．54pmol／L)和D一異蘇氨酸(D-allo-Thr)(9．54+4．82gmol／L)存在。

5、為了研究異亮氨酸的四個(gè)立體異構(gòu)體的體內(nèi)分布，本文建立了用鄰苯二甲醛(OPA)和N一乙酰-L-半胱氨酸(NAC)為手性衍生化試劑，柱前手性衍生化一反相高效液相色譜法分離生物樣品中異亮氨酸的四個(gè)立體異構(gòu)體，并以電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)進(jìn)行檢測(cè)的高靈敏度的分析方法。該分析方法對(duì)D一異亮氨酸(D-Ile)、D一別異亮氨酸(D-allo-Ile)和L一別異亮氨酸(L-allo-Ile)在5—500ng的范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)分別為0．9967、0