維生素E對(duì)鏈脲菌素所致胰島β細(xì)胞損傷的干預(yù)研究.pdf

1、目的：探討維生素E(vitamin E)對(duì)鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)所致大鼠離體胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)途徑及可能的機(jī)制。 方法：1．分組：分離1-3日齡Wistar大鼠胰腺進(jìn)行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)細(xì)胞分為4組：①正常對(duì)照組：培養(yǎng)的胰島細(xì)胞不作任何干預(yù)處理；②維生素E組：培養(yǎng)液中僅加入終濃度為0.1mM的維生素E作用60分鐘；③STZ組：培養(yǎng)液中僅加入終濃度為2.2mM的STZ作用30分鐘；④保護(hù)組：Ⅰ-Ⅳ組。培養(yǎng)

2、液中分別加入0.0125mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM的維生素E預(yù)作用60分鐘后，再加入終濃度為2.2mM的STZ作用30分鐘。各組作用時(shí)間一到，離心棄上清液，再用新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)18小時(shí)后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。2．檢測(cè)：放射免疫法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中胰島素含量，分光光度計(jì)分別測(cè)量培養(yǎng)上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平，透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，Hoechest33258熒光染色觀察熒光強(qiáng)度，流式

3、細(xì)胞儀定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，分光光度法測(cè)量胰島細(xì)胞特異性半胱氨酸酶-3(caspase-3)活性。 結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，維生素E組胰島素含量、SOD活性、MDA水平、細(xì)胞凋亡率及caspase-3活性未見(jiàn)明顯變化(p>0.05)。單純STZ作用后，胰島素含量、SOD活性顯著降低，MDA水平、細(xì)胞凋亡率及caspase-3活性明顯升高，與正常對(duì)照組比較，p<0.05。同時(shí)，電鏡觀察到凋亡細(xì)胞，Hoechest33258熒光染色

4、發(fā)現(xiàn)發(fā)明亮淡藍(lán)色強(qiáng)熒光細(xì)胞數(shù)顯著增多。而在STZ作用前給予不同濃度維生素E作預(yù)處理的四個(gè)保護(hù)組，胰島素含量、SOD活性、MDA水平雖未恢復(fù)到正常對(duì)照組水平，但其下降或上升的程度較STZ組出現(xiàn)明顯抑制(p<0.05)。而且其抑制程度隨維生素E濃度的增大而增強(qiáng)(各保護(hù)組間比較p<0.05)，其中以終濃度為0.1mM的保護(hù)作用最強(qiáng)，呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性趨勢(shì)。在終濃度為0.1mM的維生素E保護(hù)組，細(xì)胞凋亡率、caspase-3活性分別為7.8