SDF-1在慢性肝病中的臨床作用及基礎(chǔ)研究.pdf

1、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)是一種趨化因子，參與機(jī)體的血管生成、組織損傷及修復(fù)、刺激成纖維細(xì)胞增殖分化、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成等過程，趨化因子受體-4（chemokine receptor-4，CXCR4）是SDF-1的受體，SDF-1/CXCR4軸被認(rèn)為與多種纖維化相關(guān)疾病相關(guān)，如肺纖維化、肝纖維化、腎臟及皮膚纖維化。且有研究表明當(dāng)機(jī)體臟器損傷時(shí)，表達(dá)CXCR4+干細(xì)胞會循S

2、DF-1濃度差歸巢到受損臟器中，分化為相應(yīng)的實(shí)質(zhì)細(xì)胞以修復(fù)受損的臟器。
　　為了進(jìn)一步研究SDF-1/CXCR4在慢性肝病進(jìn)展中的作用，本課題分為兩部分內(nèi)容，第一部分是探討SDF-1/CXCR4在慢性乙肝纖維化中的臨床價(jià)值，第二部分體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SDF-1可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化。
　　第一部分臨床部分
　　目的:探討SDF-1/CXCR4在慢性乙型病毒性肝炎（Chronic Hepatitis B，CHB）纖

3、維化中的作用及不同纖維化階段的表達(dá)變化。
　　方法:選取2014年6月至2014年11月就診于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科門診及住院的118例CHB患者，收集患者臨床病史資料及血清學(xué)檢測結(jié)果，包括:性別、年齡、肝臟硬度值(liver stiffness measurement，LSM)、血清中乙肝病毒DNA定量(HBV DNA)、SDF-1、CXCR4、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草

4、轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、γ-轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、白蛋白(albumin，ALB)、a-L巖藻糖苷酶(a-L-fucosidase，AFU)水平。按HBV DNA數(shù)值將患者分為HBV DNA＜500 IU/ml組和HBV DNA≥500 IU/ml組;按LSM值不同分為F0-1期

5、(＜7.3 KPA)、 F2期(7.3-9.7 KPA)、F3期(9.7-17.5 KPA)、F4期(＞17.5 KPA)，將F0-1期歸為非肝纖維化組，F(xiàn)2和F3期為肝纖維化組，F(xiàn)4期為肝硬化組。比較HBV DNA＜500IU/ml組和HBV DNA≥500 IU/ml組、非肝纖維化組和肝纖維化組和肝硬化組間SDF-1、CXCR4、肝功能的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:1.入選病例在不同纖維化階段的人數(shù)構(gòu)成比
　　118例入院病例

6、中非肝纖維化組51人(43.22％)、肝纖維化組47人(39.83％)、肝硬化組20人(16.95％)。
　　2.血清中SDF-1、CXCR4在不同HBV DNA組間的表達(dá)水平
　　LgSDF-1值在HBV DNA＜500 IU/ml組為-0.20±0.47 ng/ml，HBV DNA≥500IU/ml組為-0.37±0.53 ng/ml，兩組之間差異無顯著性(P＞0.05);LgCXCR4值在HBV DNA＜500 IU/

7、ml組為-0.38±0.45 ng/ml，HBV DNA≥500 IU/ml組為-0.50±0.43ng/ml，SDF-1、CXCR4在HBV DNA＜500 IU/ml組.的表達(dá)量較HBV DNA≥500 IU/ml組高，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.血清中SDF-1、CXCR4在不同纖維分期的表達(dá)水平
　　LgSDF-1在非肝纖維化組為-0.43±0.58 ng/ml，纖維化組為-0.17±0.39

8、 ng/ml，肝硬化組為-0.15±0.48 ng/ml; LgCXCR4在非肝纖維化組為-0.56±0.53 ng/ml，纖維化組為-0.37±0.33 ng/ml，肝硬化組為-0.294±0.43 ng/ml。肝硬化組、肝纖維化組較非肝纖維化組而言血清SDF-1和CXCR4水平均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肝纖維化組和肝硬化組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.肝功能指標(biāo)在不同肝纖維化分期中的比較

9、
　　肝纖維化組較非肝纖維化組ALT增高(P＜0.05)，AST、GGT隨著肝纖維化程度加重水平逐漸升高，三組之間均有差異(P＜0.05)，肝硬化組中ALP、TBIL、AFU較非肝纖維化組明顯升高，ALB明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.SDF-1、CXCR4表達(dá)水平在HBV DNA≥500 IU/ml組比HBV DNA＜500 IU/ml組中低。
　　2.SDF-1、CXCR4表達(dá)水平隨LSM分期增加而增加，

10、對肝硬化早期診斷及預(yù)測具有一定意義。
　　3.肝功能受損與肝纖維化分期有關(guān)。
　　第二部分基礎(chǔ)研究
　　目的:探討SDF-1體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymalstem cells，BM-MSCs)肝向分化的作用。
　　方法:全骨髓貼壁培養(yǎng)法提取小鼠BM-MSCs，取P2代細(xì)胞用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)，采用4種誘導(dǎo)方案對BM-MSCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)

11、28天:A組:含有15％胎牛血清(Fetal Bovine Serum，F(xiàn)BS)的完全培養(yǎng)基的陰性對照組(negative control，NC);B組（HGF組）:添加20 ng/ml肝細(xì)胞生長因子(hepatocytegrowth factor, HGF);C組（SDF-1組）:添加50 ng/ml SDF-1;D組（HGF+SDF-1組）:添加20 ng/ml HGF+50 ng/ml SDF-1。以7天為一個(gè)培養(yǎng)周期，即7天、1

12、4天、21天、28天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)、western blot及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative PCR, Real-time PCR)檢測細(xì)胞ALB和細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin-18，CK-18)的蛋白和mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果:HGF、SDF-1組均檢測出ALB、CK-18的表達(dá)，在各組中的表達(dá)呈時(shí)間依賴性，且兩者聯(lián)用，ALB、CK-18的表達(dá)量均高于單獨(dú)應(yīng)用，