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文檔簡介
1、牛奶子(Elaeagnus umbellata Thunb.)果實富含人體所需多種氨基酸、礦質(zhì)元素、維生素、必需脂肪酸、類黃酮、番茄紅素等物質(zhì),是一種極具開發(fā)潛力的天然抗氧化劑和營養(yǎng)補充劑。它不僅可作為水果直接食用,而且其提取物更具抗癌等藥用價值,同時還有可能成為番茄的替代品用于工廠化生產(chǎn)番茄紅素,綜合開發(fā)利用前景廣泛。
由于牛奶子是野生植物,對其果實的生長發(fā)育尚不了解。為此,我們以Bio-Rad高通量雙向電泳系統(tǒng)為技術平
2、臺,通過改進和優(yōu)化牛奶子果實蛋白的提取方法及電泳條件,首次建立了一套適合牛奶子果實總蛋白的高分辨率和重復性好的雙向電泳體系,用以研究牛奶子果實成熟過程蛋白組變化,結(jié)合相關有機物的測定,來探討果實成熟的分子機制。此后,我們從上調(diào)蛋白中選擇了一個萜類物質(zhì)合成的關鍵酶--異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶(IPI),克隆得到了基因全長。結(jié)果如下:
1.用酚法提取蛋白時,適當延長第2次平衡時間,并及時更換平衡緩沖液Ⅱ,可獲得高分辨率的總蛋白圖譜。
3、這種改良了的方法解決了牛奶子果實中富含的色素和多酚等次生代謝物對雙向電泳(2-DE)的干擾問題,重復性好,適用于果實中蛋白的2-DE分析和爾后的技術操作。
2.果實成熟是一個復雜的生理生化過程,包括糖類合成、有機酸代謝和類胡蘿卜素積累等。在成熟的牛奶子果實中,葡萄糖和果糖為主要糖存在形式;蘋果酸為最豐富的有機酸;番茄紅素含量高達2345μg/g干重,相當于傳統(tǒng)番茄的17倍。利用2-DE技術篩選出63個上調(diào)表達蛋白,采用串聯(lián)
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