腹腔鏡超聲引導下肝癌射頻消融術的應用要點和miR-130a與肝細胞癌遷移侵襲關系的研究.pdf

1、目的:
　　1、總結腹腔鏡超聲引導下肝癌射頻消融術的技術要點，分析應用特點、并發(fā)癥原因和防治方法及預后。
　　2、探討三維重建術前規(guī)劃對腹腔鏡超聲引導下肝癌射頻消融術的意義。
　　3、研究一種microRNA(微小RNA)——miR-130a在肝癌組織中的表達及對肝癌遷移侵襲的影響。
　　方法:
　　1、通過回顧性研究的方式研究本中心10年905例行LRFA術患者的臨床資料、手術方式、術后情況和生存時間等，

2、總結分析肝癌LRFA技術的應用特點、并發(fā)癥原因和防治方法及預后。
　　2、通過配對研究的方式研究本中心24個月內32例通過三維重建術前規(guī)劃指導LRFA的病例資料(同第一部分)，評價三維重建術前規(guī)劃對肝癌LRFA技術的意義。
　　3、通過實時定量PCR、構建載體下調表達、Transwell、Western Blotting等分子生物學方法，在肝癌組織標本和高轉移性肝癌細胞株中研究miR-130a在肝癌組織中的表達及對肝癌遷移侵

3、襲的影響。
　　結果:
　　第一部分:
　　1.肝癌的LRFA治療是肝癌綜合治療越來越重要的一部分，病例數量逐年增加。2006-2010年組患者在把LRFA作為肝癌的首次治療手段的例數較少、肝功能Child-PughB或C級比例較高、腫瘤＞30mm比例較大(均P＜0.05)。相對于經皮RFA，更適合行LRFA的適應癥包括:①腫瘤位于肝臟表面，或外生性生長;②腫瘤較大，需多次、多針消融;③或緊鄰空腔臟器、膈肌(位于肝臟膈

4、頂部)、膽囊、心臟、第一肝門重要管道結構。
　　2.使用術后一個月增強影像學的消融區(qū)描述腫瘤是否完全滅活。89.72％(812例)患者參加了術后1個月的回訪，總首次消融完全率87.31％。2006-2010年組和2011-2015年組兩組患者首次消融完全率(81.41％，92.17％)差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。Logistic多因素回歸分析顯示:在單因素分析顯示與LRFA首次消融完全率有關的10個因素中，僅有①是否危險部

5、位(OR=3.225，P=0.000)、②肝硬化(OR=1.110，P=0.040)、③肝功能Child-Pugh評級(P=0.000)、④術腫瘤最大徑(P=0.000)、⑤腫瘤數目(P=0.001)是首次消融完全率的獨立危險因素。
　　3.兩組患者的病理活檢比例、活檢陽性率(53.62％，74.82％)都較低。2006-2010年組患者術后住院時間較長(P＜0.001)、術后ALT變化較明顯(P=0.011)。
　　4.并

6、發(fā)癥的發(fā)生率方面，Clavien-DindoⅠ-Ⅱ級并發(fā)生的發(fā)生率兩組無統(tǒng)計學差異，2011-2015年組患者Ⅲ級、Ⅳ級并發(fā)癥發(fā)生率較低(P=0.033，P=0.029)。由于LRFA在腹腔鏡直視下操作，腹腔出血(18/905)、氣胸(15/905)、膽漏(4/905)等并發(fā)癥發(fā)生率不高。腫瘤的種植轉移(4/905)應通過減少穿刺次數及增加保護措施等方法避免。
　　5.576例患者參加了術后3個月以上的回訪，回訪時間3-60個月。

7、本組患者中位無瘤生存時間(Median disease free survival， Median DFS)為23.0個月，12個月、24個月、36個月的總腫瘤復發(fā)率分別達38.24％、50.87％、52.44％?；颊叩目偵鏁r間均較長，12個月、24個月、36個月的總生存率分別達93.00％、87.00％、62.03％。Cox回歸分析顯示:在單因素分析顯示與LRFA術后DFS有關的10個因素中，僅有①是否危險部位(RR=2.130，P

8、=0.012)、②是否為轉移、復發(fā)性肝癌(RR=3.488，P=0.003)、③肝功能Child-Pugh評級(P=0.000)、④腫瘤最大徑(P=0.000)、⑤腫瘤數目(P=0.001)、⑥術前存在梗阻性黃疸(RR=1.633，P=0.031)、⑦術前存在門靜脈癌栓(RR=2.311，P=0.005)、⑧合并糖尿病(RR=1.168，P=0.028)均是研究對象行LRFA后DFS的獨立危險因素。肝癌LRFA術后無瘤生存期、遠期生存率

9、正在逐步提高。
　　第二部分:
　　1、32例行三維重建術前規(guī)劃、并按規(guī)劃行腹腔鏡超聲引導下肝癌射頻消融術(3D-LRFA)的患者，對應其診斷、腫瘤部位、肝硬化程度、乙肝背景，配對同期開展的未經術前三維重建規(guī)劃的腹腔鏡超聲引導下肝癌射頻消融術(LRFA)的患者64例。3D-RFA組與LRFA組相比，手術時間明顯縮短(P=0.0023)，術中出血量無統(tǒng)計學差異(P=0.1813)，平均進針時間明顯縮短(P=0.0214)。

10、r>　　2.兩組首次消融符合率(P=0.871)、術后Clavien-DindoⅠ-Ⅱ級和Ⅲ-Ⅳ級并發(fā)癥發(fā)生率(P=0.659，P=0.458)并無統(tǒng)計學差異。但3D-LRFA組術后住院時間較短(P=0.0160)、術后ALT變化程度較小(P=0.0477)、術后TNF-α水平較低(P=0.0273)。
　　3.兩組患者的無瘤生存期(DFS)差異有統(tǒng)計學意義(P=0.0442)。3D-LRFA組和LRFA組患者12個月無瘤生存率分

11、別為77.636％和65.736％，LRFA組患者中位無瘤生存期為16個月，而3D-LRFA組大于24個月。
　　4、通過三維重建術前規(guī)劃構建了腹腔鏡超聲引導肝癌射頻消融治療的規(guī)范化路徑，通過規(guī)范化路徑行肝癌LRFA治療能夠縮短外科醫(yī)生學習曲線。
　　第三部分:
　　1.miR-130a在肝癌組織中的表達要顯著高于對應的癌旁組織(P=0，001)，miR-130a在肝癌細胞系中的表達也明顯高于正常肝細胞(P=0，000

12、)。
　　2.Transwell實驗結果顯示，與對照組細胞相比，通過miR-130a inhibitor降低miR-130a水平的高轉移性肝癌細胞系(MHCC97-H、HCCLM3)的侵襲和轉移的能力明顯降低(P值分別為0.0004、0.0001、0.0002、0.0005)。
　　3.Western Blotting顯示下調miR-130a水平的MHCC97-H、HCCLM3兩種肝癌細胞中MMP-9和MMP-2的表達水平均

13、明顯下降，Western Blotting條帶灰度明顯降低，有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.003、0.004、0.000、0.006)。本研究證實miR-130a可以通過一定的信號通路和分子機制促進肝癌細胞EMT的過程。
　　結論:
　　1.由于LUS具有緊貼肝臟腫瘤表面掃描、分辨率較高的特點，以及腹腔鏡下能夠直視操作治療過程、處理突發(fā)狀況的優(yōu)勢，LRFA作為肝癌經皮超聲引導消融的有益補充，能夠降低術后并發(fā)癥發(fā)生率，增加手術的

14、安全性，體現了精準、微創(chuàng)的治療理念及良好的臨床應用價值。對于一些無法切除的小肝癌，腫瘤毗鄰肝內較大管道系統(tǒng)或肝臟周圍臟器，尤其合并肝硬化門脈高壓癥的患者，LRFA既是很好的手術治療方案，也是肝移植等待期的橋接方案。但LRFA的廣泛開展仍需要較高的腹腔鏡肝臟外科技巧和腹腔鏡超聲技術。
　　2.基于患者真實影像信息的肝臟重建模型是肝臟外科手術規(guī)劃中有力的工具，其可在術前模擬患者腫瘤位置和重要管道結構、規(guī)劃介入治療方案，從而縮短肝癌LR