超嗜熱古菌Sulfolobus tokodaii RadA同源蛋白的生化性質(zhì)鑒定.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文超嗜熱古菌SulfolobustokodaiiRadA同源蛋白的生化性質(zhì)鑒定姓名：朱珊珊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：申玉龍20080415山東大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要同源重組是生物中普遍存在的DNA修復(fù)途徑，它對于修復(fù)DNA斷裂、維持基因組穩(wěn)定性、重啟復(fù)制叉以及真核生物的減數(shù)分裂都具有重要作用。目前對于古菌同源重組的研究還僅處于初級階段，然而卻發(fā)現(xiàn)了相似于真核生物同源重組機(jī)制中的蛋白：重組早期處理斷裂雙鏈的

2、蛋白Mrell和Rad50；在廣古菌中存在的單鏈結(jié)合蛋白RPA；古菌中的重組酶(recombinase)RadA，它與真核生物中的Rad51具有約40％的同源性，與RecA僅有約20％的同源性；相似于真核生物中存在Rad51的同源蛋白，在廣古菌中也存在RadA的同源蛋白。RecA／Rad51／RadA是三域生物中同源重組的關(guān)鍵蛋白，在同源重組中促進(jìn)鏈交換形成Hollidayjunction結(jié)構(gòu)。在細(xì)菌及真核生物中許多蛋白參與介導(dǎo)RecA

3、／Rad51形成核蛋白絲或幫助其進(jìn)行鏈交換，如細(xì)菌中的RecBCD、RecFO煢復(fù)合體，真核生物中的Rad52、Rad54、Rad55和Rad57等。在真核生物中存在Rad51的同源蛋白包括酵母中的Rad55／Rad57復(fù)合體、高等真核生物中的Rad51B—Rad51C—Rad51D—XRCC2和Rad51CXRCC3復(fù)合體。遺傳分析表明它們參與了同源重組，其中Rad55／Rad57已被鑒定穩(wěn)定Rad51核蛋白絲的結(jié)構(gòu)。在廣古菌中也存在

4、RadA的同源蛋白RadB。然而，目前還沒有對泉古菌中RadA同源蛋白的報(bào)道。我們通過序列分析，在嗜熱泉古菌SulfolobustokodaiiStr7基因組中找到四個(gè)RadA的同源蛋白，系統(tǒng)發(fā)育分析表明它們更加相似于真核生物中的Rad55，因而我們把它們命名為stRad55A(ST0579)，stRad55B(ST0838)，stRad55C(STl830)和stRad55D(ST2522)。運(yùn)用RTPCR分析了S芒?；糜膇iradA

5、、rad55A、rad55Brad55C及tad55#基因轉(zhuǎn)錄受紫外線照射的誘導(dǎo)性，發(fā)現(xiàn)radA、rad55A和rad55B的基因轉(zhuǎn)錄是受紫外線誘導(dǎo)的，表明這些蛋白可能參與DNA修復(fù)。在￡coli中表達(dá)了這些蛋白及愛tokodaii單鏈結(jié)合蛋白SSB，其中RadA、stRad55A、stRad55C和SSB在￡coli表達(dá)菌中能夠以可溶的形式表達(dá)，stRad55B和stRad55D以包涵體的形式表達(dá)。分子篩層析結(jié)果表明RadA、stRa