2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:正常妊娠的發(fā)生和維持有賴于母體對(duì)胚胎半同種抗原的免疫耐受,一旦該狀態(tài)被打破將導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。連續(xù)發(fā)生3次或3次以上的反復(fù)性妊娠丟失患者中,約50%并無明確臨床病因,稱為不明原因反復(fù)自然妊娠丟失(URSA)。研究妊娠過程中母胎免疫耐受形成的確切機(jī)制,誘導(dǎo)母胎免疫耐受的形成是治療URSA的關(guān)鍵。
  目前國內(nèi)外多采用丈夫或第三方淋巴細(xì)胞對(duì)患者進(jìn)行主動(dòng)免疫治療,但是細(xì)胞需新鮮制備,且穩(wěn)定性差、不易保存,具有明顯局限性,不利于臨床推

2、廣。本研究采用自發(fā)性流產(chǎn)動(dòng)物模型,通過過繼轉(zhuǎn)輸淋巴細(xì)胞及其來源Exosomes,分析T細(xì)胞來源Exosomes調(diào)節(jié)妊娠丟失孕鼠母胎界面CTLA-4及FoxP3表達(dá)的變化,探究Exosomes誘導(dǎo)母胎免疫耐受機(jī)制。
  方法:
  1雄性無關(guān)個(gè)體脾細(xì)胞及其Exosomes的制備:摘眼球放血后斷頸處死BALB/c雄鼠,無菌條件下解剖取脾組織,制備脾單個(gè)細(xì)胞懸液,采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合超濾技術(shù)制取脾臟T細(xì)胞來源Exosomes。

3、
  2建立妊娠丟失實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及實(shí)驗(yàn)分組:雌雄小鼠隨機(jī)按2∶1合籠交配;以CBA/J(♀)×BALB/c(♂)為正常妊娠對(duì)照組(Control組),以CBA/J(♀)×DBA/2(♂)建立妊娠丟失動(dòng)物模型。將流產(chǎn)孕鼠隨機(jī)分為3組分別為:妊娠丟失組(URSA組,孕第4日著床期尾靜脈注射生理鹽水),細(xì)胞治療組(Cellular Therapy組,孕第4日著床期尾靜脈注射雄鼠脾細(xì)胞),非細(xì)胞治療組(Non-cellular Thera

4、py組,孕第4日著床期尾靜脈注射Exsomes)。
  3各組胚胎發(fā)育情況的觀察:于妊娠第14日處死各組CBA/J孕鼠,無菌條件下解剖,取胎盤組織,測(cè)量胎盤各徑線計(jì)算胎盤體積,分別計(jì)數(shù)各組胚胎吸收及存活個(gè)數(shù),計(jì)算各組胚胎吸收率及妊娠丟失率。
  4孕鼠母胎界面CTLA-4、FoxP3的免疫組化檢測(cè):制備孕鼠胎盤織石蠟包埋切片,免疫組化染色后進(jìn)行圖像分析,CTLA-4、FoxP3表達(dá)強(qiáng)度以灰度值(GS)表示,數(shù)值大小與陽性表達(dá)

5、強(qiáng)度呈反相關(guān);以矩形走形計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,計(jì)算各組陽性細(xì)胞表達(dá)百分率。
  5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:各組數(shù)據(jù)均通過SPSS13.0版本軟件進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢驗(yàn)。采用卡方檢驗(yàn)比較各組孕鼠胚胎發(fā)育情況,采用F檢驗(yàn)對(duì)孕鼠胎盤CTLA-4以及FoxP3的表達(dá)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),S-N-K法進(jìn)一步對(duì)多個(gè)樣本均數(shù)進(jìn)行兩兩比較。
  結(jié)果:
  1不同過繼轉(zhuǎn)輸對(duì)妊娠丟失孕鼠胚胎發(fā)育的影響
  Control組孕鼠的胚胎

6、吸收率為5.78%,URSA組顯著升高至21.17%(P<0.0005),細(xì)胞治療組、非細(xì)胞治療組分別為6.93%、3.25%。與URSA組相比,細(xì)胞治療組及非細(xì)胞治療組胚胎吸收率均顯著下降(均P<0.01),并且均下降至Control組水平(均P>0.05);非細(xì)胞治療組胚胎吸收率顯著低于細(xì)胞治療組(P<0.05)。
  Control組孕鼠的妊娠丟失率為20%,URSA組顯著升高至64%(P<0.0005),細(xì)胞治療組、非細(xì)胞

7、治療組分別為24%、16%。與URSA組相比,細(xì)胞治療組及非細(xì)胞治療組妊娠丟失率均顯著下降(均P<0.01),且均下降至Control組水平(均P>0.05);兩治療組組間比較無明顯差異(P>0.05)。
  2妊娠丟失孕鼠母胎界面CTLA-4、FoxP3表達(dá)變化的分析
  2.1母胎界面CTLA-4表達(dá)變化的分析
  Control組孕鼠胎盤組織中CTLA-4陽性細(xì)胞百分率為31.60%±2.41%,URSA組顯著下

8、降至24.80%±2.86%(P<0.01),細(xì)胞治療以及非細(xì)胞治療后陽性細(xì)胞表達(dá)率明顯回升(分別為34.80%±1.92%、40.40%±5.94%,均P<0.05)至Control組水平;且非細(xì)胞治療組回升更明顯,兩治療組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  與正常對(duì)照組孕鼠胎盤組織中CTLA-4表達(dá)GS值118.78±10.97相比,妊娠丟失組(URSA組)的表達(dá)GS值115.34±11.02,細(xì)胞治療組及非細(xì)胞治療組

9、陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度分別為127.24±4.08、125.98±6.93;四組之間的組間比較均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  2.2母胎界面FoxP3表達(dá)變化的分析
  control組孕鼠胎盤組織中FoxP3陽性細(xì)胞百分率為32.40%±4.50%, URSA陽性細(xì)胞百分率顯著下降至23.4%±2.61%(P<0.01),細(xì)胞治療以及非細(xì)胞治療后陽性細(xì)胞表達(dá)率明顯回升(分別為30.00%±3.39%、45.80%±7.

10、16%,均P<0.05)至Control組水平;且兩治療組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  與正常對(duì)照組孕鼠胎盤組織中FoxP3表達(dá)強(qiáng)度(116.05±2.48)相比,妊娠丟失組(URSA組)的表達(dá)強(qiáng)度115.59±3.64,差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);細(xì)胞治療組及非細(xì)胞治療組陽性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度分別為115.47±3.44,110.17±4.19;經(jīng)非細(xì)胞治療后表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng),但兩治療組之間及與control組、U

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