JNK和Akt細(xì)胞內(nèi)信號通路調(diào)控TNF-α誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)IL-32：肺臟炎癥反應(yīng)的一種潛在機(jī)制.pdf

1、目的：
　　呼吸道疾病包括呼吸道感染、支氣管哮喘、肺結(jié)核、肺纖維化和慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種全球性疾病，世界上有數(shù)百萬人深受這類疾病的困擾。COPD導(dǎo)致的死亡預(yù)計(jì)到2020年將排世界第三位；全世界300百萬人患有支氣管哮喘，其導(dǎo)致的死亡人數(shù)每年達(dá)18萬。人肺成纖維細(xì)胞（Human pulmonary fibroblasts,HPF）不僅是肺的結(jié)構(gòu)

2、細(xì)胞，而且在肺固有免疫中扮演著重要角色。IL-32作為氣道炎癥中一個(gè)重要的炎癥因子，促進(jìn)肺部炎癥發(fā)展，在肺部感染中有抵御感染的作用，在肺成纖維細(xì)胞當(dāng)中的免疫學(xué)作用尚未有報(bào)道。TNF-α是氣道炎癥發(fā)展過程中一個(gè)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子。研究氣道炎癥疾病中TNF-α調(diào)節(jié)人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)IL-32的機(jī)制，有助于我們了解氣道炎癥的發(fā)展過程。
　　方法：
　　Q-PCR檢測炎癥刺激因子處理的人肺成纖維細(xì)胞中 IL-32因子的mRNA表達(dá)變化；

3、TNF-α單獨(dú)或與其它因子聯(lián)合處理的人肺成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，采用ELISA檢測上清中IL-32蛋白水平的變化；Western blot檢測TNF-α處理的人肺成纖維細(xì)胞內(nèi)信號通路蛋白JNK和Akt的磷酸化水平；采用信號通路抑制劑聯(lián)合TNF-α處理的人肺成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，采用ELISA檢測上清中IL-32蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　TNF-α誘導(dǎo)可人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)IL-32因子的四種mRNA剪接體（α、β、γ和δ

4、）的表達(dá)增高，且具有一定的劑量依賴性。TNF-α誘導(dǎo)上調(diào)的IL-32蛋白主要是活性最強(qiáng)的IL-32γ蛋白，IL-32α蛋白并無誘導(dǎo)表達(dá)。與IL-17C、LPS、IFN-γ、Poly I:C、HMGB-1、Leptin和IL-27聯(lián)合誘導(dǎo)HPF后，其IL-32γ蛋白水平較TNF-α單獨(dú)刺激組無顯著差異，提示這些因子與TNF-α無協(xié)同作用。TNF-α激活人肺成纖維細(xì)胞后，在10分鐘、20分鐘時(shí)JNK和Akt的磷酸化顯著增高。JNK抑制劑和A