FG-4592通過誘導HIF-1alpha促進小鼠脊髓損傷后的功能恢復及神經元保護.pdf

1、第一部分 FG-4592對體外培養(yǎng)的PC12細胞的保護作用及其機制研究
　　目的:
　　脯氨酸羥化酶(prolyl hydroxylase，PHD)抑制劑FG-4592對體外培養(yǎng)的PC12細胞（大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤，常用的神經細胞株）的保護作用及其機制的研究。
　　方法及結果:
　　以不同濃度的叔丁基過氧化氫(tert-Butyl hydroperoxide，TBHP)(0、50、100、150、300、600μ

2、 M)作用于PC12細胞4小時，然后采用CCK-8檢測細胞活力，結果顯示PC12細胞的活力隨叔丁基過氧化氫濃度的增高而降低。為了研究FG-4592對PC12的保護作用，我們用不同濃度的FG-4592(0、5、20、50μM)預處理PC12細胞6小時，然后再用叔丁基過氧化氫(150μ M)作用經FG-4592預處理的細胞4小時，采用CCK-8檢測細胞活力，結果顯示PC12細胞的活力隨FG-4592濃度的增高而增加。用FG-4592(50μ

3、 M)預處理PC12細胞6小時，然后再用叔丁基過氧化氫(150μM)作用經FG-4592預處理的PC12細胞，采用western blot檢測PC12細胞中低氧誘導因子-1α（HIF-1α）蛋白以及凋亡相關蛋白如Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl2的表達，結果顯示經FG-4592預處理的PC12細胞低氧誘導因子-1α的表達上升，Cleaved Caspase-3和Bax的表達下降、Bcl2的表達上升，說明FG-4592能

4、穩(wěn)定PC12細胞中低氧誘導因子-1α的表達并抑制TBHP對PC12細胞造成的凋亡。用FG-4592(50μM)和低氧誘導因子-1α的特異性抑制劑YC-1(100μM)共同預處理PC12細胞6小時，然后再用叔丁基過氧化氫(150μM)作用經FG-4592和YC-1預處理的PC12細胞，采用western blot檢測PC12細胞中低氧誘導因子-1α(HIF-1α)蛋白以及凋亡相關蛋白如Cleaved Caspase-3、Bax、 Bcl2

5、的表達，結果顯示經FG-4592和YC-1共同預處理的PC12細胞低氧誘導因子-1α的表達下降，Cleaved Caspase-3和Bax的表達上升，Bcl2的表達下降，說明YC-1可以抑制低氧誘導因子-1α的表達，破壞FG-4592對PC12細胞的保護作用。
　　結論:
　　FG-4592通過穩(wěn)定PC12細胞中低氧誘導因子-1α的表達從而抑制叔丁基過氧化氫引起的細胞凋亡。
　　第二部分 FG-4592對小鼠脊髓損傷保

6、護作用的研究
　　目的:
　　研究脯氨酸羥化酶(prolyl hydroxylase，PHD)抑制劑FG-4592對小鼠脊髓損傷的保護作用。
　　方法及結果:
　　采用擠壓型方法來制作C57BL/6小鼠急性脊髓損傷動物模型，即用動脈血管夾(15g，1min)鉗夾脊髓T9節(jié)段造成脊髓損傷模型。72只成年雌性C57BL/6小鼠，隨機分為以下四組:假手術組、脊髓損傷組、FG-4592給藥組、FG-4592與YC-1共同

7、給藥組，術后采用BMS評分對其后肢運動功能進行評價。發(fā)現給予FG-4592組術后BMS評分優(yōu)于脊髓損傷組，但FG-4592與YC-1共同給藥組術后BMS評分較FG-4592給藥組有所下降。說明FG-4592對脊髓損傷小鼠的功能恢復有促進作用，而改促進作用可以被YC-1破壞。另外，我們于術后第7天處死小鼠，收集脊髓損傷節(jié)段作為組織標本分別用于石蠟包埋切片HE染色、尼氏染色和Western blot。Western blot結果顯示FG-4

8、592給藥組小鼠脊髓中低氧誘導因子-1α的表達較脊髓損傷組有所升高，而FG-4592與YC-1共同給藥組小鼠脊髓中低氧誘導因子-1α較FG-4592給藥組有所降低。采用HE染色方法觀察損傷脊髓細胞形態(tài)變化，發(fā)現FG-4592給藥組可以減少小鼠脊髓損傷造成的組織出血、核固縮等損傷。而在FG-4592與YC-1共同給藥組中，小鼠脊髓損傷造成的組織出血、核固縮等損傷較FG-4592給藥組更為嚴重。采用尼氏染色的方法觀察損傷脊髓中神經元的數量，