lentivims介導(dǎo)神經(jīng)營養(yǎng)因子-3促進(jìn)脊髓損傷大鼠功能恢復(fù)

1、2 0 0 5 年 7月第 2 1 卷第 7 期 C h i nJT r a u m a ， J u l y2 0 0 5 ， V o 1 ． 2 1 ? N o ． 7L e n t i v i r u s 介導(dǎo)神經(jīng)營養(yǎng) 因子 一 3促進(jìn)脊髓損傷大 鼠功能恢復(fù) 蔡培 強(qiáng) 湯遜 林 月秋 O u d e g aM a r t 徐 林 B l i t sB 陽運(yùn) 康 · 48 5 ·· 脊 柱 脊 髓 損 傷

2、 ·【 摘要】目的 探討 L e n t i v i r u s 介導(dǎo)分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子 一 3 ( N T一 3 ) 直接體內(nèi)轉(zhuǎn)基因治療大 鼠脊髓損傷作用和機(jī)制。方法 將 2 8只 Wi s t a r 大鼠在 T 。 。 水平制成半橫斷損傷模型， 隨機(jī)分為 體內(nèi)轉(zhuǎn)基因治療組和損傷對(duì)照組 ， 每組 1 4只； 用攜帶 N T 一 3和綠色熒光蛋白( G F P ) 的L e n t i v i r u s 對(duì) 大鼠行直接體內(nèi)轉(zhuǎn)

3、基因治療； 熒光顯微鏡觀察體內(nèi)轉(zhuǎn)基因表達(dá)， 后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法( B B B評(píng)分 )檢測(cè)大鼠后肢功能恢復(fù)情況。結(jié)果 用熒光顯微鏡檢測(cè)到損傷脊髓內(nèi)有較多的持續(xù)表達(dá)轉(zhuǎn)基 因 的細(xì)胞 ； B B B 評(píng)分結(jié)果顯示， 從傷后第4 周開始， 實(shí)驗(yàn)組大 鼠后肢功能較對(duì)照組明顯恢復(fù)( P<0 ． 0 1 ) ， 至第 1 0 周時(shí)， 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 B B B分差增大， 達(dá) 3 ． 3 分。結(jié)論 L e n t i v i r u s 是一種有

4、效 的轉(zhuǎn)基因載體 ， 由 L e n t i v i r u s 介導(dǎo)分泌 N T一 3的直接體 內(nèi)轉(zhuǎn)基因治療能夠明顯促進(jìn)損傷脊髓的功 能恢復(fù)。【 關(guān)鍵詞】 慢病毒； 脊髓損傷 ； 治療 ， 轉(zhuǎn)基因； 神經(jīng)營養(yǎng)因子 一 3 ； 綠色熒光蛋白L e n t i v i r u s - me d i a t e dn e u r o t r o p h i cf a c t o r - 3i nt h ei n j u r e da d u

5、 l tr a ts p i na lc o r di mp r o v e sh i n dl i mbf un c t i o n a lr e c o v e r yC A ，Pe i — q i a n g，T A NGXu n，L I N Y u e — q i u ， Ou d e g aMa r t ，XUL i n，Bl i t sB，Y A N GY u n - k a n g ． D e p a r t m e n

6、 to fO r t h o p a e d i c s ， K u n m i n gG e n e r a lH o s p i t a lo f C h e n d uM i l i t a r yC o m m a n d ，Ku n mi n g6 5 0 0 3 2，C h i n a ．C o r r e s p o n d i n ga u t h o r ：T A NG X u n，E ma i Z ： T a n

7、 g x u n 6 2 0 9 @ 1 6 3 n e t【 A b s t r ac t 】O b j e c t i v eT oe x p l o r et h et h e r a p e u t i cm e c h a n i s ma n de f f e c to fL e n t i v i r u s — m e d i a t e dn e u r o t r o p h i cf a c t o r - 3(

8、N T 一 3 )g e n et r a n s f e ri nt r e a t m e n to ft h ei n j u r e da d u l tr a ts p i n a lc o r d ．Me t h o d sHe mi s e c t i o no fs p i n a l c o r da tt h el e v e lo fT 1 0we r ep r o d u c e di n2 8a d u l

9、tW i s t a rr a t st h a twe r er a n d o ml yd i v i d e di n t ot w og r o u p s( n：1 4 ) ： t r a n s g e n i ct h e r a p yg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ．T h ee x p er i m e n t a lg ro u pw a st r e a t e dd i

10、 r e c t l yi nv i v ow i t hL e n t i v i r u st h a tc o n t a i n e dN T - 3a n dg re e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i n( G F P ) ．T h e n ，t h et r a n s g e n i ce x p r e s s i o ni nv i v owa sd e t e c t e d

11、wi t hf l u o r e s c e n c emi c r o s c o p ea n dt h er e c o v e r yo ff u n c t i o ne s t i ma t e dwi t ht h eme t h o do fBB B．Re s u l t sGF Ps h o w e dma n yc e l l st h a th a de x p r e s s e do b —j e c t i

12、 v eg e n ef o rt w om o n t h si nv i v oa n dB B Bd e t e c t e dt h a tt h eh i n d — l i m bf u n c t i o no ft h ei n j u r e dr a th a da c —q u i _ ~ x lo b v i o u si mp r o v e me n t ．Co n c l u s i o n sL e n

13、t i v i r u s — me d i a t e dNT 一 3g e n et r a n s f e rC a n p r o mo t et h ef un c t i o n a lr e c o v e r yo fi n j u r e ds p i n a lc o r db yi m p r o v i n gt h el o c a lm i c r o e n v i r o n m e n to ft

14、h ei n j u r e ds p i n a lc o r d ．Ad d i t i o n a ll y，L e n t i v i r u si sa n e f e c t i v et r a n s g e n i cv e c t o rt h a tc a nb ea p p l i e dwi d e l yi nt h eb a s i cs t u d ya ndt hef u r t h e rc l

15、i n i c a la p p l i c a t i o nf o rt r e a t m e n to ft h es p i n a lc o r di n j u r y．【 K e yw o r d s 】 L e n t i v i r u s ；S p i n a lc o r di n j u r i e s ； T he r a p y ， t r a n s g e n e s ；N e u r o t r o

16、p h i cf a c t o r 一3；Gr ee nf l u o r e s c e n c ep r o t e i n s近年來 的實(shí)驗(yàn)研究表 明 ， 脊髓損 傷( s p i n a lc o r di n j u r y ， S C I ) 后軸突再生和功能恢復(fù)障礙的主要原因 是創(chuàng)傷所致脊髓 內(nèi)功能細(xì)胞缺失 、 神經(jīng)營養(yǎng)因子或 誘導(dǎo)因子不足以及損傷微環(huán)境 中存在的各種抑制軸 基金項(xiàng) 目： 云南省 自然科學(xué) 基金資助項(xiàng) 目

17、( 2 0 0 2 C 0 0 7 0 M)作者單位 ： 6 5 0 0 3 2 昆明 ， 成都 軍 區(qū)昆明總 醫(yī) 院骨科 ( 蔡培 強(qiáng) 、湯遜 、 林月秋 、 陽運(yùn)康 ) ； T h eM i a m iP r o j e c tt oC u r eP a r a l y s i s ， U n i v e r s i t yo fM i a m iS c h o o lo fM e d i c i n e ， M i a m i ，

18、 F L3 3 1 0 1 ， U S A( M ． O U D E G A ) ；中國科 學(xué)院昆明動(dòng)物 研究所 ( 徐林 ) ； G r a d u a t eS c h o lf o rN e u r o s c i e n c —e sA ms t e r d a m ， Ne t h e r l a n d sI n s t i t u t ef o rB r a i nR e s e a rc h， A m s t e r d

19、 a m ，T h eN e t h e r l a nd s( B ． S L I T S )通訊作者 ： 湯遜 ， E m a i l ： T a ng x u n 6 2 0 9 @1 6 3 ． n e t突功能性再生 的因素 ， 致使絕 大部分軸突 的再生努 力歸于失敗 ， 即所謂 “ 夭折性 再生 ” 。所 以， 從 調(diào)整 S C I 后局部微環(huán)境角度促進(jìn) 損傷脊髓軸 突再 生和功 能恢 復(fù)已成為當(dāng)前研究的重要方 向。筆者將

20、攜帶神 經(jīng)營養(yǎng)因子 一 3 ( n e u r o t r o p h i cf a c t o r 一 3 ， N T一 3 ) 和綠 色熒光蛋 白( g r e e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i n ， G F P ) 標(biāo)記基 因的 L e n t i v i r u s 對(duì) T 。 。 脊髓半橫斷損傷大鼠進(jìn)行直接 的體 內(nèi)轉(zhuǎn)基因治療 ， 使其在體 內(nèi)表達(dá) 目的基 因； 用熒 光顯微鏡觀察體

21、 內(nèi)轉(zhuǎn)基因表達(dá)和后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分 法 ( B B B評(píng)分 ) 評(píng)價(jià)大鼠運(yùn) 動(dòng)功能恢復(fù)情況 ； 并探討 維普資訊 http://www.cqvip.com 2 結(jié) 果 2I 轉(zhuǎn) 陽 2 9 3 I 細(xì) 葉 世 的一此做鏡觀察一圯鏡 】 、 ¨ f刮 2 9 3 I川 包趣強(qiáng)I 堅(jiān) J 矗巾的贊一、 圳胞 比鷹 艄弱 多圳胞聚蟾的 靛 較 強(qiáng) ：比通 址Mn 川下 f】到 兒乎 I o o q 4 l I ! J2 9 3 I咆

22、 叢 【I “ I ’ (I l _ _ I1一 嘲 I# 1 0 # JL ，2 t )『 r fn? 、? E圯m 【r1 2IIL ¨ _ ^『IJ I ’ } I ～I(xiàn)I2 0 3I}I ¨ I【Ⅶ J·【 】l¨ 1Ml _¨‘h I2 uI?JI 】“¨uI『 m }( _ l Ix】 ㈣ 22物學(xué)活榆洲I 4一 I 情鼠的 I l ?埔 非4 8I IJrI到

23、轉(zhuǎn) 鞋川2 0 3 I? 胞 l清培 養(yǎng)州 【 ) Ic l ， t l _ I長， 輔 定 U( ， 晰晰 麻林 地 f ：，l J 絀 狀 阡斷 地 發(fā)m 圩芷 f ¨奎“ 成網(wǎng)． K廈 出r 』川{ f的血徑 f I 』沒有 鐘經(jīng) 兒向訃i k 徙． 喪 l ¨ _ 轉(zhuǎn) 田2 9 31 圳 旭九 勺 麓介贍 f 吖I 較 “I ’ 一 3量} j 袁J 生(2 a j在爵通 2 9 3I 細(xì)岫 l清 液則

24、只到 怖疏 的軸 趕從胎 I 1 1 i IK出 ． 川 L9 1的軸 定 較 恕{2 I i }目 2J0ru } 忙f l , ! l lI j 聃 I b lJ {I№ ∞眥I ¨，n ． | 】J mI? 1 】 Ⅱ J粹-』I ~ Jh ' iI1 “ ．x| 】23點(diǎn)糸 殳’交的f 憧 纖 糾 I 膜 【 ， 只 f 『 轉(zhuǎn) 娃困 2 9 3 l _ 細(xì) 胞 養(yǎng)液 鉛筆』內(nèi)可 虬到齄色斑點(diǎn) ，他兩個(gè)l

25、 剖內(nèi) 什幺山?jīng)]有 { l 矧3 j ． 蛻明轉(zhuǎn) 璉 』 I l2 9 3 T胞 喬 l 清澈巾 仃較尚濃度的3 蚩 124B l { l { 坪 圩所柯脊儲(chǔ) 橫蜥 損傷 第 1天的 I { I ； B1 I訃均 勻 I2舒左． 之晤后呲功能還沖 f 慨復(fù) ： 存?zhèn)?l 4一 I ，廳組 剛對(duì)照組 的后脞J能恢 復(fù)情況無 明別 ； ( r th ^ 篳 2JF 蚧 ．驗(yàn) 的 H I I B坪 行明J 刊組 第7 【 】 七． 衍竹鲴

26、對(duì)照 瞰 l j J { l jl ’ l舒最 趕-選刊 33表 I )25機(jī) 傷稈髓 內(nèi)病理 變化扯脊P I l l , ' , l 傷部位搜J I 鄰近部 的r一 2 0 02 立I l IA I色 的片． 川 見 劍 較 多 制 亡靜 元 和 幢質(zhì)細(xì)胞 捌} l 1 1 經(jīng) 兒 J 胞梭 淋i I 弓 色． 也漿生棕褐 色(4 u ) ： 而捌L的腔質(zhì)細(xì)胞肜狀較小． 胞核 。 _ J 胞漿 l _舒．深描包 狀(4 l