內(nèi)皮素受體在肝臟疾病進(jìn)程中肝組織的表達(dá)差異.pdf

1、本文分為以下幾個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分 內(nèi)皮素受體在肝血管瘤、肝硬化、肝癌及癌旁組織中表達(dá)差異
　　目的：
　　內(nèi)皮素受體（ETR）是內(nèi)皮素系統(tǒng)中的重要組成部分，是引起肝硬化門脈高壓的一類受體分子。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素（ET）可通過激活ETR調(diào)控多種信號通路參與纖維化過程，內(nèi)皮素受體A（ETAR）參與肝癌的侵襲與轉(zhuǎn)移過程，但ETR在肝硬化-肝癌的進(jìn)程中的表達(dá)差異研究甚少，本文通過檢測內(nèi)皮素受體在不同進(jìn)程肝組織中的表達(dá)差

2、異，旨在探討內(nèi)皮素受體在肝硬化-肝癌發(fā)生及進(jìn)展中的作用。
　　方法：
　　收集臨床外科手術(shù)病人肝血管瘤及肝癌標(biāo)本，臨床試驗(yàn)病人肝穿組織樣本（早期肝硬化），共分為作為肝血管瘤（n=13）、肝硬化組（n=15）、肝癌組（n=15）及癌旁組(n=15)。 Western blot檢測四組肝組織中ETAR、ETBR及α-SMA蛋白表達(dá)，并應(yīng)用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)四組相對灰度值有無顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　采用Weste

3、rn blot方法檢測不同肝組織中ETAR、ETBR及α-SMA表達(dá)（圖1），通過相對灰度值分析可見ETAR在肝癌組織高表達(dá)，血管瘤次之，與癌旁比較具有顯著性差異（p<0.05），ETBR在肝硬化中表達(dá)最多，與血管瘤、癌旁及肝癌中表達(dá)有顯著差異（p<0.05）。α-SMA四者之間比較均無顯著差異（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　　ETAR表達(dá)趨勢強(qiáng)弱依次為肝癌>肝血管瘤>肝硬化>癌旁，可能與HSC增殖活化、數(shù)目增多有關(guān)，所以

4、ETAR與腫瘤的生長、進(jìn)展、細(xì)胞增殖、血管新生及侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。ETBR在肝硬化中表達(dá)最多，說明ETBR而介導(dǎo)HSC松弛，參與調(diào)節(jié)肝竇血流變化，介導(dǎo)肝竇舒張，降低門脈壓力及門脈血流。
　　第二部分 內(nèi)皮素受體A在肝星狀細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)差異
　　目的：
　　研究己證明內(nèi)皮素受體在肝臟細(xì)胞中表達(dá)，ETAR主要分布于血管平滑肌細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞，ETBR主要分布于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（LSECs）及肝星狀細(xì)胞（HSCs）。內(nèi)皮

5、素受體具有HSCs活化的幾乎所有功能，對通過調(diào)節(jié)HSC收縮、在肝內(nèi)外血管阻力及門脈高壓形成中發(fā)揮重要作用.通過第一章結(jié)論我們可基本得出ETAR與細(xì)胞增殖、血管新生、腫瘤的發(fā)生密切相關(guān).這一章我們通過分析不同肝臟細(xì)胞—HSCs及LSECs上的內(nèi)皮素受體A表達(dá)差異，進(jìn)一步探討ETAR在肝臟疾病進(jìn)程中的作用。
　　方法：
　　同樣按第一章方法將臨床標(biāo)本分為四組：肝血管瘤組，肝硬化組，癌旁組及肝癌組。采用免疫熒光雙染法定位肝星狀細(xì)胞

6、及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞上的ETAR，通過記錄陽性細(xì)胞數(shù)及百分比，采用 Mann-Whitney檢驗(yàn)和 Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析不同肝組織中HSCs及LSECs上的ETAR表達(dá)差異是否具有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示ETAR陽性細(xì)胞數(shù)在肝血管瘤、肝硬化、肝癌、癌旁共4組中，肝癌、血管瘤比肝硬化及癌旁組織ETAR表達(dá)明顯增多（p<0.05），有顯著差異，表達(dá)趨勢強(qiáng)弱依次為肝癌>血管瘤>肝硬化>癌旁。
　　

7、ETAR及α-SMA表達(dá)均為陽性在上述4組中，血管瘤同時(shí)表達(dá)ETAR和α-SMA細(xì)胞數(shù)較肝硬化及癌旁增多（p<0.05）。
　　ETAR與CD31表達(dá)均為陽性在上述4組中，表達(dá)強(qiáng)弱依次為肝血管瘤>肝癌>肝硬化>癌旁，各組之間進(jìn)行兩兩比較，分析p值>0.05，無顯著意義。
　　結(jié)論：
　　ETAR在肝癌組織中表達(dá)最強(qiáng)，說明ETAR主要分布于血管平滑肌細(xì)胞，參與血管生成、腫瘤的發(fā)生。而ETAR及α-SMA均為陽性的細(xì)胞在血

8、管瘤組織中表達(dá)較多，說明ETAR主要分布于血管平滑肌細(xì)胞，同樣CD31及ETAR均為陽性的細(xì)胞在血管來源的正常對照組織中表達(dá)較強(qiáng)。因此，我們認(rèn)為，ETAR與血管新生、腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。
　　第三部分 內(nèi)皮素受體A表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性
　　目的：
　　內(nèi)皮素受體在肝硬化門脈高壓形成過程中起著重要作用，同時(shí)也參與肝癌的進(jìn)展過程。本章通過分析第二章免疫熒光統(tǒng)計(jì)內(nèi)皮素受體A（ETAR）陽性細(xì)胞數(shù)、ETAR與 CD31、ET

9、AR與α-SMA共同表達(dá)的陽性細(xì)胞與臨床肝硬化指標(biāo)如血小板計(jì)數(shù)（PLT）、門脈內(nèi)徑、脾臟厚度，肝癌指標(biāo)甲胎蛋白（AFP），及肝功能如谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）等的相關(guān)性，探討ETaR在肝硬化-肝癌進(jìn)程中的作用。
　　方法：
　　運(yùn)用SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析第二章不同肝組織陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，采用單因素方差分析的方法進(jìn)行各組之間的兩兩比較，分析統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值小于0.05代表

10、有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　統(tǒng)計(jì)資料后顯示ETAR陽性細(xì)胞數(shù)與指標(biāo)PLT、AFP及門脈內(nèi)徑具有相關(guān)性，p值分別為0.035、0.015、0.008，均<0.05，其中與指標(biāo)PLT、AFP呈正相關(guān)，與門脈內(nèi)徑呈明顯負(fù)相關(guān)（p<0.01）。ETAR與α-SMA均為陽性細(xì)胞數(shù)與指標(biāo)ALT呈相關(guān)性， p值為0.047（p<0.05），Pearson系數(shù)為-0.449，呈負(fù)相關(guān)性。ETAR與CD31均為陽性細(xì)胞數(shù)與指標(biāo)門脈內(nèi)徑