IL-22對角質(zhì)形成細胞表達HB-EGF及TIG3作用機制的研究.pdf

1、銀屑病是臨床常見的慢性易復(fù)發(fā)的紅斑、鱗屑性疾病。本病臨床可分為尋常型、關(guān)節(jié)病型、紅皮病型、膿皰型4個類型。病程慢性，反復(fù)發(fā)作。其發(fā)病機理尚未完全明確。目前研究認為銀屑病的發(fā)病機制主要是由輔助性Th細胞及其相關(guān)細胞因子介導(dǎo)的以角質(zhì)形成細胞為靶點的炎癥反應(yīng)。
　　Th22細胞是新發(fā)現(xiàn)的CD4+輔助性T細胞亞群，在銀屑病外周血中高表達，其主要細胞因子為IL-22。通過其實現(xiàn)相關(guān)生物學(xué)功能。在銀屑病病人外周血及皮損中IL-22水平和銀屑病

2、的嚴重程度呈明顯的正相關(guān)。我們的前期研究表明肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子(heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor, HB-EGF)在銀屑病表皮KC異常增殖和其轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。本課題的前期研究表明 IL-22可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)HaCaT細胞表達HB-EGF，但作用機制未明，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK-ERK1/2)通路和轉(zhuǎn)錄激活因子途徑（JAK/STAT）

3、這兩種信號通路在銀屑病發(fā)病機制中起不可或缺作用。他扎羅汀誘導(dǎo)基因3（Tazarotene-induced gene3, TIG3）是一種腫瘤抑制因子。TIG3可以調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細胞的增殖和分化，在銀屑病表達降低。
　　綜上所述，我們推測IL-22促 KC分泌HB-EGF可能與MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路有關(guān)，且與TIG3表達異常存在一定關(guān)系。IL-22通過促進HB-EGF表達，抑制TIG3表達參與銀屑病發(fā)生

4、、發(fā)展。本實驗研究IL-22促HaCaT細胞分泌HB-EGF作用機制及對HaCaT細胞分泌TIG3的影響。
　　目的：研究白介素22（Interleukin-22，IL-22）對角質(zhì)形成細胞表達HB-EGF的作用機制和對TIG3表達影響及作用機制。
　　方法：
　　1、以不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和PBS作用于HaCaT細胞24小時后，提取細胞總蛋白，用Weste

5、rn blot法檢測IL-22對細胞MAPK-ERK1/2和JAK/STAT這兩條信號通路的影響；應(yīng)用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22作用于HaCaT細胞后分別提取干預(yù)后細胞總蛋白及總mRNA，用Western blot法、ELISA法和實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測其對HaCaT細胞分泌HB-EGF的影響。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，P<0.05認為有顯著性差異。
　

6、　2、應(yīng)用咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠背部皮膚產(chǎn)生銀屑病樣皮損，然后皮損處皮下注射1μg IL-22，48h后處死小鼠，取下背部皮膚，HE染色觀察小鼠皮膚的改變，免疫組化觀察HB-EGF的表達。
　　3、用不同濃度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和應(yīng)用相關(guān)信號通路阻斷劑PD98059和AG490與IL-22處理HaCaT細胞，對照組用等量PBS處理，應(yīng)用免疫熒光法檢測細胞內(nèi)TIG3蛋白的表達位置，分別

7、提取干預(yù)后的細胞總蛋白及總mRNA，用Western blot法、ELISA法和實時熒光定量RT-PCR法檢測其對HaCaT細胞分泌TIG3的影響。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，P<0.05認為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1、IL-22可誘導(dǎo)HaCaT細胞MAPK信號通路中P-ERK1/2蛋白的增加和JAK2/STAT3信號通路中P-JAK2和P-STAT3蛋白的升高。加入信號通路特異性抑制劑PD9805

8、9及AG490后HB-EGF蛋白和mRNA的表達較IL-22干預(yù)組明顯降低。
　　2、咪喹莫特持續(xù)作用于Bal B/c小鼠背部，可以成功誘導(dǎo)小鼠銀屑病樣皮損， IL-22皮下注射可引起正常Bal B/c小鼠背部及銀屑病小鼠皮膚表皮中HB-EGF表達的升高。
　　3、IL-22可引起HaCaT細胞中TIG3蛋白水平的降低，其作用的強度與濃度有關(guān)：不同濃度IL-22處理組的細胞分泌TIG3的量均較對照組降低，且隨著IL-22濃度

9、的升高，其對TIG3表達的抑制作用逐漸增強。應(yīng)用信號通路特異性抑制劑PD98059及AG490后IL-22對TIG3抑制作用較IL-22組減少。差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：IL-22可以引起HaCaT細胞中MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路激活。IL-22誘導(dǎo) HaCaT細胞產(chǎn)生 HB-EGF蛋白的作用機制可能與MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3這兩條信號通路有關(guān)。IL-22可引起B(yǎng)al B/c