IL-22和IL-22受體在尋常型銀屑病皮損中的表達(dá).pdf

1、前言：
　　 銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病。針對(duì)銀屑病的發(fā)病機(jī)制的研究較多。但人們通常認(rèn)為其中最關(guān)鍵的是T細(xì)胞的活化,由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞因子刺激了角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖,而增殖的角質(zhì)形成細(xì)胞又釋放出了其他的細(xì)胞因子,再次增強(qiáng)了活化T細(xì)胞的作用。從而形成了一個(gè)由T細(xì)胞介導(dǎo)的惡性循環(huán)。傳統(tǒng)學(xué)說(shuō)當(dāng)中Th1細(xì)胞及其所分泌的細(xì)胞因子在銀屑病的發(fā)病過(guò)程中起到了極其重要的作用。而Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)對(duì)這種傳統(tǒng)的觀點(diǎn)提出了挑戰(zhàn)。IL-

2、22就是Th17所分泌的一個(gè)重要的細(xì)胞因子。
　　 白細(xì)胞介素22(Interleukin-22,IL-22)是一種在鼠的T淋巴細(xì)胞內(nèi)由白細(xì)胞介素9誘導(dǎo)所產(chǎn)生的一種新的細(xì)胞因子。是IL-10家族當(dāng)中的一名新的成員,其在人和鼠中均是由179個(gè)氨基酸殘基所組成,其中包括了4個(gè)半胱氨酸。分子量約為20kD。其編碼基因在人中定位于染色體12q15,包含了5個(gè)內(nèi)含子與6個(gè)外顯子,全長(zhǎng)約為6kb。
　　 白細(xì)胞介素22的受體是由兩條

3、鏈所組成的異源二聚體,分別被稱為CRF2-9和CRF2-4,它們均屬于Ⅱ型的細(xì)胞因子受體家族。其中CRF2-9主要表達(dá)在肝、胰、腎、腸等正常組織中,同時(shí)在結(jié)腸腺癌SW480、肺癌A549與黑色素瘤G321等腫瘤細(xì)胞中也有高表達(dá);而CRF2-4則是廣泛存在于全身各組織中。
　　 近年來(lái),國(guó)內(nèi)外的多項(xiàng)研究表明IL-22和IL-22受體在自身免疫性疾病、感染性疾病及惡性腫瘤中均有表達(dá)。尤其是在尋常型銀屑病發(fā)病機(jī)制的研究當(dāng)中發(fā)現(xiàn),IL-

4、22及其受體在銀屑病患者的外周血中都有高表達(dá)。并且其表達(dá)的程度與疾病的發(fā)病程度有著一定的關(guān)系。然而在國(guó)內(nèi)對(duì)于IL-22和IL-22受體的研究主要集中在血清學(xué)的檢測(cè),以免疫熒光法和熒光實(shí)時(shí)定量PCR法來(lái)研究在尋常性銀屑病的皮損中IL-22與IL-22R的表達(dá)的研究較少。
　　 因此,我們的研究目的是:以免疫熒光法和熒光實(shí)時(shí)定量PCR法研究IL-22與IL-22受體在尋常型銀屑病患者皮損中的表達(dá),并與其在健康人的皮損中的表達(dá)進(jìn)行對(duì)照

5、。進(jìn)而評(píng)定IL-22與IL-22受體在尋常型銀屑病皮損中的表達(dá)。
　　 材料與方法：
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 (一)病例與標(biāo)本
　　 進(jìn)展期尋常型銀屑病皮損冰凍標(biāo)本31例,女11例,男20例,年齡27～88歲,平均63.54±17.9歲。正常對(duì)照皮膚16例,女7例,男9例。年齡49～78歲,平均63.7±8.7歲。尋常型銀屑病病例病例均來(lái)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,經(jīng)臨床、病理檢查確診為銀屑病。正

6、常對(duì)照系我科皮膚外科患者的正常皮損。
　　 (二)主要試劑
　　 OCT包埋劑(Sakura,Japan)、鼠抗人IL-22單抗(R&D,USA)、鼠抗人IL-22R單抗(R& D,USA)、驢抗鼠IgG的熒光二抗(R&D,USA)、PBS緩沖液、TRNZOL液(Takara)、異丙醇、DEPC水、RT-PCR試劑盒(TAKARA)、IL-22R Real-time引物(上海生工)、β-actin Real-time引物

7、(上海生工)、TE緩沖液、IL-22 Real-time引物(上海生工)
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1.利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)進(jìn)展期尋常型銀屑病和正常人的皮損中IL-22mRNA和IL-22RmRNA的相對(duì)表達(dá)的差異。
　　 2.利用免疫熒光方法對(duì)進(jìn)展期尋常型銀屑病和正常人的皮損中的II-22及IL-22受體進(jìn)行檢測(cè),從而比較IL-22及IL-22受體在銀屑病人與健康人皮損中的表達(dá)差異。
　　

8、結(jié)果：
　　 1、尋常型銀屑病進(jìn)展期患者的皮損中IL-22mRNA和IL-22RmRNA的表達(dá)與正常對(duì)照組相比明顯增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、尋常型銀屑病進(jìn)展期患者的皮損中IL-22及IL-22R的表達(dá)與正常對(duì)照組相比明顯增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、尋常型銀屑病皮損中的IL-22mRNA,IL-22RmRNA的相對(duì)表達(dá)量呈高表達(dá)。
　　 2、I