仙臺(tái)病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)HSV-2靶基因的免疫學(xué)效果研究.pdf

1、中國(guó)藥品生物制品檢定所碩士研究生學(xué)位論文中國(guó)藥品生物制品檢定所碩士研究生學(xué)位論文仙臺(tái)病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究姓名：付志浩仙臺(tái)病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究姓名：付志浩學(xué)號(hào)：845030610010201學(xué)號(hào)：845030610010201專業(yè)：免疫學(xué)專業(yè)：免疫學(xué)導(dǎo)師姓名：王軍志研究員導(dǎo)師姓名：王軍志研究員指導(dǎo)教師：饒春明研究員指

2、導(dǎo)教師：饒春明研究員李永紅副研究員李永紅副研究員二00九年七月二00九年七月中國(guó)藥品生物制品檢定所碩士學(xué)位論文1仙臺(tái)病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究仙臺(tái)病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)HSV2靶基因的免疫學(xué)效果研究研究生：付志浩導(dǎo)師：王軍志研究員摘要摘要仙臺(tái)病毒（SendaiVirusSeV）屬于副粘病毒科呼吸道病毒屬，基因組為不分節(jié)段的單負(fù)鏈RNA，編碼NP，P，M

3、，F(xiàn)，HN，L等11個(gè)蛋白。應(yīng)用仙臺(tái)病毒改造的F基因缺失型仙臺(tái)病毒載體（SendaivirusVectSeV）是新興的RNA病毒載體，由于其宿主范圍廣、表達(dá)量高、胞質(zhì)表達(dá)、安全性好等諸多優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛用于基因治療藥物和疫苗研究。本課題上篇為針對(duì)一種仙臺(tái)病毒基因治療產(chǎn)品（攜帶hFGF2外源基因的F基因缺失型仙臺(tái)病毒，SeVhFGF2dF）及其包裝細(xì)胞庫(kù)（導(dǎo)入F基因的恒河猴腎細(xì)胞，LLCMK2F）的質(zhì)量控制研究。其中產(chǎn)品質(zhì)量控制研究主要包括

4、結(jié)構(gòu)確認(rèn)、純度、病毒滴度、體外表達(dá)和生物學(xué)活性以及特殊殘留物質(zhì)檢測(cè)，在該部分的研究過(guò)程中，建立了兩個(gè)易于標(biāo)準(zhǔn)化和精確度較高的方法，其中一項(xiàng)為“應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)病毒載體類基因治療藥物感染滴度”，該方法通過(guò)建立適合病毒感染細(xì)胞特點(diǎn)的數(shù)學(xué)模型和相應(yīng)操作流程，并確定了方法質(zhì)控指標(biāo)，結(jié)果證實(shí)該數(shù)學(xué)模型適合病毒感染細(xì)胞的特點(diǎn)，所得結(jié)果重現(xiàn)性良好。另一項(xiàng)方法學(xué)研究為“應(yīng)用PicoGreen熒光法檢測(cè)DNA殘留”，通過(guò)加標(biāo)回收率對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正，證實(shí)該

5、方法較傳統(tǒng)的斑點(diǎn)雜交法定量準(zhǔn)確，且操作簡(jiǎn)便，靈敏度高。細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量控制研究主要包括細(xì)胞鑒別，內(nèi)外源病毒因子檢測(cè)，逆轉(zhuǎn)錄酶檢測(cè)等。其中細(xì)胞鑒別實(shí)驗(yàn)藥典三部無(wú)明確方法細(xì)則，本部分方法學(xué)研究通過(guò)DNA指紋圖譜、同工酶檢測(cè)和細(xì)胞表面F蛋白檢測(cè)，從遺傳，生化酶學(xué)以及重組細(xì)胞目的蛋白三方面對(duì)細(xì)胞進(jìn)行有效鑒別。課題的下篇為仙臺(tái)病毒載體介導(dǎo)Ⅱ型單純皰疹病毒（HSV2）靶基因的免疫學(xué)效果研究，首先選取HSV2的糖蛋白D（gD）和核蛋白ICP27由課題合作