血管緊張素AT1受體通路激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PP2A導(dǎo)致eNOS Ser1177磷酸化水平下調(diào)的機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）/血管緊張素Ⅱ1型受體（AngiotensionⅡ Receptor1，AT1R）通路激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）PP2A（Protein Phosphatase2A，PP2A）導(dǎo)致eNOS Ser1177磷酸化水平下調(diào)的分子機(jī)制。
　　方法:
　　首先明確AngⅡ下調(diào)

2、HUVECs中eNOS Ser1177的濃度及時(shí)間依賴效應(yīng)，將 HUVECs隨機(jī)分為正常對照（Control）組和AngⅡ處理組（AngⅡ濃度分別為1.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L和1.0×10-5mol/L），AngⅡ處理時(shí)間分別為12h、24h和36h。然后根據(jù)AngⅡ下調(diào)eNOS Ser1177的濃度和時(shí)間效應(yīng)，進(jìn)一步探討eNOS Ser1177下調(diào)的分

3、子機(jī)制，將 HUVECs隨機(jī)分為4組，分別為正常對照（Control）組、AngⅡ處理組（AngⅡ終濃度為1.0×10-7mol/L和1.0×10-6mol/L，處理12h）、單純CAN組[采用AT1R阻斷劑坎地沙坦（candesartan，CAN)終濃度為1.0×10-6mol/L，預(yù)處理3h］和CAN+AngⅡ組（CAN的使用濃度和時(shí)間同單純CAN組，AngⅡ的使用濃度和時(shí)間同AngⅡ處理組）。用Western blot方法檢測各組

4、eNOS蛋白表達(dá)、eNOS Ser1177位點(diǎn)磷酸化水平、PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2Ac-Tyr307位點(diǎn)磷酸化水平和PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)水平。采用化學(xué)比色法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)基中NO含量。
　　結(jié)果：
　?、倥cControl組比較，給予1.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、1.0×10-5mol/L的AngⅡ分別處理 HUVEC

5、s12h、24h、36h后，eNOS Ser1177磷酸化水平均下調(diào)（p<0.05），AngⅡ各組間eNOS Ser1177磷酸化水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而各組間eNOS蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②與同一濃度AngⅡ處理12h組比較，CAN預(yù)處理組可上調(diào)eNOS Ser1177磷酸化水平，而eNOS蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③與Control組比較，AngⅡ處理12h后PP2Ac-Tyr307磷酸化水平下調(diào)（p<0.05）；與同一

6、濃度AngⅡ處理12h組比較，CAN預(yù)處理組可上調(diào)PP2Ac-Tyr307磷酸化水平（p<0.05），而各組間PP2A-Cα蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④與Control組比較，AngⅡ處理12h后PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)減少（p<0.05）；與同一濃度AngⅡ處理12h組比較，CAN預(yù)處理組可增加PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)（p<0.05）。⑤與Control組比較，AngⅡ處理12h后細(xì)胞培養(yǎng)基中NO含量減

7、少（p<0.05）；與同一濃度AngⅡ處理12h組比較，CAN預(yù)處理組可增加細(xì)胞培養(yǎng)基中NO含量（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　AngⅡ可通過AT1R通路導(dǎo)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS Ser1177磷酸化水平下調(diào)，NO產(chǎn)生減少，這一效應(yīng)可能與通過降低PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)和PP2Ac亞基的Tyr307位點(diǎn)磷酸化水平，導(dǎo)致PP2A活性增強(qiáng)相關(guān)。而AT1R阻滯劑CAN預(yù)處理，可通過增加I2PP2A的表達(dá)，上