丹參酚酸A抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖及功能異常的作用研究.pdf

1、目的：本實驗旨在觀察丹參酚酸A(SalA)對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖與功能異常的抑制作用，并對其作用機制進行初步探討，研究SalA抗早期動脈粥樣硬化的機理，為今后SalA作為預(yù)防和治療動脈粥樣硬化性疾病提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)細胞株培養(yǎng)：應(yīng)用含10％ FBS及肝素、內(nèi)皮細胞生長因子(ECGS)的F12K培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2-3天換液。
　　 (2)實驗

2、分為：正常對照組、SalA組、AngII組、AngII及SalA濃度梯度及時間組。
　　 (3)噻唑藍(MTT)比色法觀察細胞增殖情況；免疫印跡實驗(Western blot)測定p-Src，p-Akt473，NOX1蛋白表達；流式細胞儀檢測HUVECs中ROS的含量；分光光度計檢測HUVECs中鈣離子濃度。
　　 結(jié)果：
　　 (1)MTT結(jié)果顯示丹參酚酸A對HUVECs本身活性有影響，選擇12.5uM、25u

3、M、50uM的濃度進行實驗。與對照組相比，AngII能明顯促進HUVECs的增殖。與AngII組相比，加用SalA組抑制AngII誘導(dǎo)的HUVECs增殖，并且SalA呈濃度依賴性抑制HUVECs增殖，以50uM作用最為顯著。
　　 (2)Westernblot結(jié)果顯示SalA組p-Src、p-Akt473蛋白表達明顯低于同時間點的AngⅡ組，SalA能顯著抑制p-Src、p-Akt473的活化。
　　 (3)Wester

4、nblot結(jié)果顯示SalA組p-Akt473、p-Src蛋白表達明顯低于AngⅡ組，SalA可明顯降低AngII誘導(dǎo)的Akt、Src磷酸化水平并呈濃度及時間依賴性。
　　 (4)Western blot結(jié)果顯示SalA可顯著抑制NOX1的蛋白表達，并呈濃度及時間依賴性。
　　 (5)流式細胞儀結(jié)果顯示SalA可顯著減少HUVECs中ROS的產(chǎn)生，并呈濃度依賴性。
　　 (6)分光光度計結(jié)果顯示SaIA可顯著降低H

5、UVECs中鈣離子濃度，并呈濃度依賴性。
　　 結(jié)論：
　　 1．SalA可顯著抑制AngII誘導(dǎo)的HUVECs增殖，并呈劑量依賴性。
　　 2．SalA通過呈濃度及時間依賴性降低Src、Akt蛋白磷酸化水平從而抑制AngII誘導(dǎo)的HUVECs增殖。
　　 3．SaIA通過抑制AngII誘導(dǎo)的Noxl的表達，減少ROS的產(chǎn)生。
　　 4．SalA降低AngII誘導(dǎo)的ROS的產(chǎn)生及細胞內(nèi)鈣離子濃度保