VEGF-a增強(qiáng)BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化及機(jī)制的研究.pdf

1、骨折、骨缺損以及骨不連是臨床骨科常見疾病，作為現(xiàn)階段最佳的治療方法之自體骨移植然而也存在其明顯缺點(diǎn)（增加手術(shù)時間、失血、取材有限、增加患者痛苦等）。因此，如何應(yīng)用組織工程的理論和技術(shù)研究一種或者多種強(qiáng)有力的成骨誘導(dǎo)因子變得非常重要。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)作為組織工程人工骨中理想的種子細(xì)胞，如何有效地促進(jìn) MSCs向成骨方向分化是組織工程研究熱點(diǎn)。本研究旨在主要研究血管內(nèi)皮生長a（vascu

2、lar endothelial growth factor-a，VEGF-a）增強(qiáng)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（bone morphogenetic protein9，BMP9）介導(dǎo)MSCs成骨分化以及機(jī)制的研究。本研究采用半定量RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色（ICC）、Western blot、堿性磷酸酶（ALP）活性檢測與染色、茜素紅S染色、體內(nèi)異位成骨實(shí)驗(yàn)、Micro-CT（μ-CT）三維成像以及組織切片染色等實(shí)驗(yàn)方法。首先，檢測VEGF-a

3、的內(nèi)源性表達(dá)以及重組腺病毒adVEGF-a外源性表達(dá)情況；其次，檢測VEGF-a對BMP9介導(dǎo)MSCs成骨分化早晚期成骨標(biāo)志物活性指標(biāo)ALP、OPN、OCN以及鈣鹽沉積的影響；然后，利用VEGF-a重組腺病毒通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，分析VEGF-a對BMP9介導(dǎo)MSCs異位成骨的影響；最后，利用PI3K/Akt抑制劑(LY294002)對VEGF-a影響B(tài)MP9介導(dǎo)MSCs成骨分化進(jìn)行機(jī)制分析。結(jié)果顯示，VEGF-a在MSCs中（MEFs、C3H

4、10T1/2、C2C12以及MC3T3E1）均有表達(dá)，但內(nèi)源性表達(dá)均很低；VEGF-a能協(xié)同增強(qiáng)BMP9介導(dǎo)MEFs成骨分化的早晚期成骨標(biāo)志物的活性；在異位成骨實(shí)驗(yàn)中，VEGF-a能增加BMP9介導(dǎo)MEFs異位成骨活性，能明顯增加骨體積，提高成骨活性，但骨密度卻有所下降；VEGF-a協(xié)同增強(qiáng)BMP9介導(dǎo)MEFs成骨分化過程中能明顯激活PI3K/Akt信號通路。應(yīng)用PI3K/Akt抑制劑（LY294002）能明顯抵消這種協(xié)同作用。綜上結(jié)果