MiR-106b調(diào)控靶基因Smad7通過EMT促進(jìn)食管鱗癌的侵襲和轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的:研究微小 RNAl06b(miR-106b)在食管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，及其對(duì)Smad7的調(diào)控影響，為臨床治療食管癌提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.在組織水平，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)90對(duì)食管鱗癌及其對(duì)應(yīng)的正常食管組織中Smad7的表達(dá)情況，分析miR-106b與Smad7的相關(guān)性，探討miR-106b、Smad7表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。
　　2.在細(xì)胞水平，分別轉(zhuǎn)染慢病毒 LV-has-mir-

2、106b和陰性對(duì)照病毒CON238于食管癌細(xì)胞株KYSE150，轉(zhuǎn)染慢病毒LV-has-mir-106b-inhibition和陰性對(duì)照病毒CON137于食管癌細(xì)胞株KYSE450后，實(shí)驗(yàn)分為上調(diào)組和下調(diào)組。
　　上調(diào)組：control組(未轉(zhuǎn)染miR-106b的KYSE150細(xì)胞組)、NC組(轉(zhuǎn)染隨機(jī)序列組，陰性對(duì)照病毒CON238)和miR-106b組(轉(zhuǎn)染miR-106b的KYSE150的細(xì)胞組)；
　　下調(diào)組：con

3、trol組(未轉(zhuǎn)染miR-106b-inhibition的KYSE450細(xì)胞組)、NC-inhibitor組(轉(zhuǎn)染隨機(jī)序列組，陰性對(duì)照病毒CON137)和miR-106b-inhibition組(轉(zhuǎn)染miR-106b-inhibitor的KYSE450細(xì)胞組);
　　采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫印跡（Western Blot）分別檢測(cè)miR-106b、S

4、mad7 mRNA的表達(dá)水平、Smad7的蛋白表達(dá)水平和EMT的相關(guān)標(biāo)記物(上皮型鈣黏蛋白（E-Cadherin）、神經(jīng)型鈣黏蛋白(N-Cadherin）的蛋白表達(dá)水平，四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，Transwell方法檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-106與Smad7的調(diào)控關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1. Smad7

5、在食管鱗癌組織中的表達(dá)顯著低于對(duì)應(yīng)的正常食管組織(P<0.05)，其表達(dá)水平與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、分化程度、大體分型無關(guān)(P﹥0.05)。
　　2.慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 miR-106b后，Smad7 mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)。食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力均增強(qiáng)(P<0.05)；qRT-PCR與Western blot檢測(cè)顯示miR-106b組E-Cadherin表達(dá)較N

6、C組、control組、明顯降低(P<0.05)；N-Cadherin表達(dá)明顯升高(P<0.05)。反之，慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染miR-106b-inhibition后，Smad7 mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)，食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力均降低(P<0.05)；qRT-PCR與Western blot檢測(cè)顯示miR-106b-inhibition組E-Cadherin表達(dá)較NC-inhibitor組、contro