半乳糖-膽固醇配體修飾物藥學(xué)及藥動學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)研究合成的半乳糖-膽固醇((5-Cholesten-3β-yl)[(4-O-β-D-galactopyranosy1)D-Glucitol-6] Decanedioic acid(Chol-Gal))可作為一種肝臟靶向的載體。本實(shí)驗(yàn)將Chol-Gal作為一種具有肝臟靶向的藥用載體進(jìn)行研究，對其進(jìn)行系統(tǒng)質(zhì)量研究，并對Chol-Gal在動物體內(nèi)藥代動力學(xué)過程進(jìn)行研究，促進(jìn)對這種藥用載體的全面認(rèn)識。本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)制備了質(zhì)量

2、穩(wěn)定且合格的Chol-Gal修飾的脂質(zhì)體，本研究中研究了Chol-Gal修飾脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)的藥動學(xué)過程，對Chol-Gal修飾脂質(zhì)體的體內(nèi)動力學(xué)資料進(jìn)行了補(bǔ)充，促進(jìn)該給藥劑型的發(fā)展。
　　方法:
　　1、對半乳糖-膽固醇配體修飾物進(jìn)行藥學(xué)研究。按照藥典規(guī)定方法研究Chol-Gal的理化性質(zhì)，進(jìn)行硫酸鹽、重金屬檢查，采用氣象色譜法檢查殘留溶劑，利用高效液相色譜法研究有關(guān)物質(zhì)并對Chol-Gal進(jìn)行含量測定。
　　2、C

3、hol-Gal藥動學(xué)研究:
　?、龠x擇健康SD大鼠為動物模型，進(jìn)行不同劑量Chol-Gal大鼠體內(nèi)藥動學(xué)實(shí)驗(yàn)。選取7、14、17 mg·kg-1三種劑量作為研究劑量，將Chol-Gal制成注射液經(jīng)尾靜脈注射入大鼠體內(nèi)，分別于給藥后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6h眼眶取血，采用HPLC法測定藥物濃度，使用DAS2.0藥動學(xué)軟件計算各劑量藥動學(xué)參數(shù)，得出Chol-Gal在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的過程，并且觀察藥動學(xué)參數(shù)是否具

4、線性特征。
　?、谶x擇健康昆明小鼠為動物模型，選取150mg·kg-1作為試驗(yàn)劑量。Chol-Gal經(jīng)尾靜脈注射入小鼠體內(nèi)，分別于給藥后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8h眼眶取血后，處死，取心、肝、脾、肺、腎等器官，采用HPLC法測定藥物濃度，計算各樣品濃度，觀察Chol-Gal在小鼠血漿及各臟器濃度的變化，Chol-Gal在小鼠體內(nèi)分布過程。使用DAS2.0藥動學(xué)軟件計算藥動學(xué)參數(shù)，并利用Te等指標(biāo)計算小鼠肝臟靶

5、向性，驗(yàn)證Chol-Gal的肝臟靶向性。
　　3、Chol-Gal修飾的多烯紫杉醇脂質(zhì)體家兔體內(nèi)藥動學(xué)研究。選擇新西蘭大耳兔為動物模型，7mg·kg-1劑量為實(shí)驗(yàn)劑量，以多烯紫杉醇注射液、多烯紫杉醇普通脂質(zhì)體、Chol-Gal修飾的多烯紫杉醇脂質(zhì)體作為研究劑型，通過耳緣靜脈注射，分別于注射后的15、30、45min及1、2、4h耳中動脈取血，采用LC-MS/MS法測定家兔血漿多烯紫杉醇含量，利用DAS2.0藥動學(xué)軟件計算藥動學(xué)參數(shù)

6、，得出三種劑型的多烯紫杉醇在家兔體內(nèi)的藥動學(xué)特征并進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　1、Chol-Gal藥學(xué)研究結(jié)果:為乳白色膏狀固體物質(zhì)，對環(huán)己烷、氯仿等脂溶性溶劑溶解性較好，各殘留溶劑均符合藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。有機(jī)雜質(zhì)小于總物質(zhì)的1％，建立了合理的高效液相色譜法對含量進(jìn)行測定，三批輔料含量穩(wěn)定。
　　2、Chol-Gal藥動學(xué)研究結(jié)果:
　?、俑咝б合嗌V法對大鼠血漿中Chol-Gal進(jìn)行含量測定，專屬性、穩(wěn)定性、精密度

7、、提取回收率等方法學(xué)考察均符合實(shí)驗(yàn)要求。大鼠分別以7、14、17 mg·kg-1單次注射Chol-Gal注射液，AUC(0-∞)值分別為10.70、14.04及16.37mg/L*h，Cmax值分別為36.64、45.46及59.19mg/L，AUC(0-∞)值及Cmax值均隨劑量增加而增加，呈線性相關(guān)。而CL為1左右的常數(shù)，與劑量無關(guān)。
　　②高效液相色譜法對小鼠血漿及組織中Chol-Gal進(jìn)行含量測定，專屬性、穩(wěn)定性、精密度、

8、提取回收率等方法學(xué)考察均符合實(shí)驗(yàn)要求。小鼠以150mg·kg-1劑量單次注射Chol-Gal注射液，Chol-Gal首先通過血液流入全身，在血液中濃度最高，隨后主要進(jìn)入血流量較大的心臟，心臟中含量較高，隨后才進(jìn)入肝、肺、腎，肝臟中藥物的分布最高。在脾中無樣品測出，Chol-Gal肝臟的Te為2.006，Tce為66.73％。
　　3、Chol-Gal修飾多烯紫杉醇脂質(zhì)體家兔體內(nèi)藥動學(xué)結(jié)果:LC-MS/MS經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，專屬性、精密

9、度、穩(wěn)定性、提取回收率等均符合生物樣品測定標(biāo)準(zhǔn)。通過DAS2.0計算DOC-I、DOC-L及DOC-Gal-L三種制劑在家兔體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果為，DOC-I、DOC-L、DOC-Gal-L的t1/2分別為59.9min、112.8min、81.9min; MRT(0-t)分別為71.1、125.6、77.7min; Vz分別為51.049、50.149、81.372L·kg-1。
　　結(jié)論:
　　1、本論文建立了半乳糖-

10、膽固醇配體修飾物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)切實(shí)可行，可作為Chol-Gal的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　2、Chol-Gal藥動學(xué)研究結(jié)論:
　　①大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究結(jié)果，高、中、低三種劑量藥動學(xué)特征顯示，AUC(0-∞)值、Cmax值均隨劑量增加而增加，CL、Vd值為一常數(shù)，不隨劑量增加改變，以上特征反映出大鼠體內(nèi)半乳糖-膽固醇藥動學(xué)特征呈劑量線性相關(guān)。
　?、谛∈篌w內(nèi)組織分布研究結(jié)果，在肝臟中的含量及滯留時間大于其他器官，Te及T

11、ce顯示，半乳糖-膽固醇具有一定的肝臟靶向性。
　　3、DOC在家兔體內(nèi)藥動學(xué)研究結(jié)論: DOC-L的t1/2、MRT與DOC-I及DOC-Gal-L相比要長，可能是因?yàn)镈OC-I迅速被從血漿及體內(nèi)消除，而DOC-Gal-L迅速被分布于其靶向器官肝臟的原因。DOC-Gal-L的Vz要比DOC-I及DOC-L要高，可能也是因?yàn)槠浔谎杆侔邢虻礁闻K的原因。這與之前所做的大鼠體內(nèi)藥動學(xué)具有相似的特征。家兔體內(nèi)藥動學(xué)從一定程度可以證明DOC