反向PCR精確定位人結(jié)腸癌SW480細胞CD133基因啟動子區(qū)脫氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位點.pdf

1、目的：
　　利用反向PCR（inverse-PCR）方法精確定位人結(jié)腸癌SW480細胞CD133基因啟動子區(qū)對脫氧核糖核酸酶I(DNaseI）酶切敏感位點，探討此方法在研究腫瘤細胞基因調(diào)控方面應用的可行性。
　　方法：
　　以人結(jié)腸癌細胞系SW480為研究模型，細胞培養(yǎng)數(shù)量達到107時提取細胞核，10U/ml DNaseI切割SW480細胞核中的染色質(zhì)后，按照苯酚/氯仿/異戊醇（10：10：1）方法提取基因組，用限制性

2、內(nèi)切酶EcoRI和XmalI片段化基因組，通過末端補平、T4連接酶連接成環(huán)等過程，利用反向PCR擴增產(chǎn)物，并將PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后連入pMD-18 T載體，轉(zhuǎn)入到大腸桿菌TOP10株中進行表達，篩選陽性克隆進行基因測序。
　　結(jié)果：
　　通過測序，人結(jié)腸癌SW480細胞CD133基因轉(zhuǎn)錄起始點上游9個DNaseI高敏感位點被鑒別出來，它們位于第一個外顯子-700～-300bp堿基區(qū)域內(nèi)。
　　結(jié)論：
　　應用反向P