蘋果花的質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、蘋果花來源于薔薇科植物蘋果Malus pumila Mill的干燥花。4-5月間采摘，陰干，放置干燥處貯存。蘋果花性平，歸脾、胃、腎經(jīng)。蘋果花茶有治療神經(jīng)痛，解毒，補(bǔ)血，明目，祛痘，美白的作用。經(jīng)查閱，未找到有關(guān)蘋果花的文獻(xiàn)。目前市場上蘋果花以花茶的形式銷售，但未收載于任何質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，其質(zhì)量難以有效控制。因此，本試驗(yàn)對蘋果花性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物（熱浸法）等項(xiàng)目進(jìn)行研究，并進(jìn)行了有效成分

2、根皮素的含量測定方法研究。在此基礎(chǔ)上對8個(gè)省份收集到的12批蘋果花進(jìn)行了HPLC指紋圖譜研究分析，可為蘋果花的品種鑒別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供一定的依據(jù)。
　　目的：根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定方法要求，對各個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行研究，為蘋果花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、對8個(gè)省份收集到的12批蘋果花樣品進(jìn)行性狀鑒別、顯微鑒別研究，測定12批樣品中雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量。
　　2、薄層色譜方法的建立

3、
　?。?）提取條件：實(shí)驗(yàn)過程中摸索了不同的提取溶劑及提取方法，篩選最佳的提取溶劑和提取方法。（2）展開條件：根據(jù)蘋果花成分的特點(diǎn)，確定合適的展開劑、固定相和顯色劑等。
　　3、含量測定方法的建立
　?。?）提取條件：考察不同提取方法、不同提取溶劑及其濃度、不同提取時(shí)間、不同濃度鹽酸水解液、不同粉末粒度對提取蘋果花中專屬性有效成分根皮素的影響，選擇根皮素提取率最高的提取條件。（2）色譜條件：篩選最佳檢測波長，選擇合適的

4、固定相，調(diào)整流動相的組成、比例，選擇槲皮素峰、根皮素峰、山柰素峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度較好的色譜條件。（3）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在上述色譜條件下，考察根皮素色譜峰的理論板數(shù)和分離度。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制系列濃度的根皮素對照品溶液，分別進(jìn)樣，記錄根皮素的峰面積，以根皮素濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（5）精密度試驗(yàn)：分別取同一份對照品溶液與同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定根皮素的峰面積，計(jì)算RSD值。（6）重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱

5、取同一批蘋果花樣品6份，配制供試品溶液，分別進(jìn)樣，測定根皮素的峰面積，計(jì)算RSD值。（7）穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別取同一份對照品溶液與同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24、48h進(jìn)樣分析，測定根皮素峰面積，計(jì)算RSD值。（8）回收率試驗(yàn)：精密稱取已知根皮素含量的蘋果花適量，分別加入相當(dāng)于樣品中所含根皮素含量的80％、100%、120%的根皮素對照品溶液，配制供試品溶液，分別進(jìn)樣，測定根皮素的含量，計(jì)算其回收率和RSD值。（9）檢測

6、限與定量限的測定：將根皮素對照品溶液逐級稀釋，當(dāng)信噪比大于等于3時(shí)，為檢測限；當(dāng)信噪比大于等于10時(shí)，為定量限。（10）耐用性試驗(yàn)：采用三根不同品牌的色譜柱、兩臺不同品牌的高效液相色譜儀分別測定1批樣品的含量，計(jì)算RSD值及RD值。（11）樣品測定：在上述色譜條件下，測定12批蘋果花中根皮素的含量。
　　4、指紋圖譜方法的建立
　?。?）提取條件和色譜條件的選擇除檢測波長為260nm外，其他條件同含量測定項(xiàng)下。（2）精密度試

7、驗(yàn)：取同一份供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄保留時(shí)間和峰面積。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批蘋果花6份，配制供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積。（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、12、24、48h進(jìn)樣分析，記錄保留時(shí)間和峰面積。（5）指紋圖譜的建立：取不同省份來源的蘋果花12個(gè)批次，配制供試品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析及相似度評價(jià)。
　　結(jié)果：
　　1、確定了蘋果花性狀和粉末顯微鑒別特征；雜質(zhì)測定

8、結(jié)果為1%～3%；水分測定結(jié)果為5.9%～7.9%；總灰分測定結(jié)果為6.2%～8.5%；酸不溶性灰分測定結(jié)果為0.6%～2.0%；醇溶性浸出物（熱浸法）測定結(jié)果為34.9%～41.7%。
　　2、薄層色譜法
　?。?）提取方法：取本品粉末0.5g，置具塞三角燒瓶中，加乙醇40mL，密塞，超聲處理20分鐘，放冷，搖勻，濾過。取續(xù)濾液20 mL，置250 mL三角燒瓶中，加乙醇20 mL，25%鹽酸溶液10 mL，搖勻，置85℃

9、水浴中加熱回流30分鐘，蒸干。殘?jiān)右掖?mL使溶解，作為供試品溶液。（2）展開條件：薄層板為硅膠G板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7∶2∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照樣品色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
　　3、含量測定方法
　　（1）提取條件：取本品粉末（過四號篩）約0.2g，精密稱定，

10、置具塞三角燒瓶中，精密加入乙醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，置100mL三角燒瓶中，加乙醇10mL，25%鹽酸溶液5mL，搖勻，置85℃水浴中加熱回流1小時(shí)，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。（2）色譜條件：采用YMC ODS-A C18（250 mm*4.6 mm，5μm）色譜柱；流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液

11、（50:50）；檢測波長為286nm；流速1.0mL·min-1；柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL。（3）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在此色譜條件下，理論板數(shù)按根皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，分離度大于1.5。（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：根皮素在1.23137～246.274μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，回歸方程為y=40466x-6026，r＝1.0000(n=6)。（5）精密度試驗(yàn)：儀器和方法精密度良好，RSD均為0.1%。（6）重復(fù)性試驗(yàn)：樣品重復(fù)性

12、良好，RSD為0.2%。（7）穩(wěn)定性試驗(yàn)：對照品溶液和供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD值分別為0.2%和0.1%。（8）回收率試驗(yàn)：根皮素的平均回收率為104%， RSD為1.7%。（9）根皮素的檢測限為0.4ng，定量限為1.2ng。（10）耐用性試驗(yàn)：色譜柱和儀器耐用性良好。（11）蘋果花中根皮素的含量結(jié)果為2.3%～4.2%。
　　4、指紋圖譜方法
　?。?）提取條件和色譜條件的選擇除檢測波長為260nm外，其他

13、條件同含量測定項(xiàng)下。（2）精密度試驗(yàn)：根皮素峰為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保留時(shí)間和占總峰面積2%以上共有峰的相對峰面積，其RSD值分別為0.03%～0.11%和0.25%～0.98%，精密度良好。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：12個(gè)主要共有峰相對保留時(shí)間和占總峰面積2%以上色譜峰的相對峰面積均無明顯變化，其RSD值分別為0.02%～0.10%和0.19%～1.36%，重復(fù)性良好。（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)：樣品在48h內(nèi)，12個(gè)共有峰相對保留時(shí)間和占總峰面積

14、2%以上色譜峰的相對峰面積均無明顯變化，其RSD值分別為0.04%～0.19%和0.10%～1.04%，穩(wěn)定性良好。（5）指紋圖譜的建立：得到不同產(chǎn)地蘋果花的指紋圖譜及12個(gè)共有峰。（6）數(shù)據(jù)分析：運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件”2004年A版（國家藥典委員會開發(fā)）”對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所得結(jié)果能為蘋果花的品種鑒別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。
　　結(jié)論：
　　1、性狀鑒別、顯微鑒別、檢查項(xiàng)、醇溶性浸出物方法穩(wěn)定。

15、r>　　2、薄層色譜
　　該方法斑點(diǎn)清晰可見，分離度、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，能夠很好的作為蘋果花的定性鑒別手段。
　　3、含量測定
　　以專屬性有效成分根皮素的含量為主要指標(biāo)，建立了蘋果花的定量分析方法，該方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，可用于評價(jià)蘋果花質(zhì)量，為蘋果花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定基礎(chǔ)。
　　4、指紋圖譜
　　通過建立蘋果花的高效液相色譜指紋圖譜，生成對照圖譜，計(jì)算相似度，該方法精密度和重復(fù)性良好，能夠