APOL1基因變異對中國FSGS患者影響的研究.pdf

1、局灶節(jié)段腎小球硬化（FSGS）是難治性腎病綜合征和終末期腎病最常見的原因之一，遺傳因素在其發(fā)病和進展中起重要作用。前期研究顯示APOL1的G1和G2變異與FSGS的發(fā)病與進展密切相關。但該結果并沒有在中國人群中得到重復。提示我國FSGS可能存在其他APOL1變異。
　　本研究的目的是：（1）對APOL1基因單核苷酸多態(tài)性和單體型進行分析，探索APOL1基因單體型對不同人群中疾病的易感性。（2）檢測FSGS患者和正常對照組中APOL

2、1基因拷貝數(shù)的情況，通過比較拷貝數(shù)變異在兩組的分布情況，探索APOL1基因拷貝數(shù)變異對中國FSGS患者臨床治療與預后之間的可能意義。（3）利用本課題組前期發(fā)現(xiàn)的APOL1新突變，構建突變質粒和野生型質粒轉染到永生化的足細胞，研究該APOL1突變對細胞標志蛋白、細胞骨架和離子通道的影響，并探索其參與FSGS足細胞損傷的可能機制。
　　我們的研究方法包括（1）從千人基因組數(shù)據中篩選 APOL1基因 SNP，統(tǒng)計不同區(qū)域APOL1單體型

3、，并比較每個單體型在不同人群中的分布情況。（2）篩選符合條件的FSGS患者DNA樣本；通過設計APOL1引物和探針進行Taqman拷貝數(shù)變異實驗；使用Copy Caller軟件分析結果，SPSS分析FSGS患者與正常對照組中APOL1基因拷貝數(shù)分布差異及不同拷貝數(shù)的FSGS患者臨床預后的差異。（3）將突變質粒轉染至細胞后動態(tài)追蹤細胞形態(tài)的改變，western blot檢測足細胞標志蛋白，自噬標志物，信號轉導蛋白分子的表達水平；激光共聚焦

4、檢測足細胞骨架的改變及線粒體損傷情況，并用膜片鉗技術檢測足細胞膜離子通道的變化。
　　研究結果顯示（1）APOL1基因各個區(qū)域的單體型在不同人群的分布都具有明顯差異。大部分單體型在混合人群和歐洲人群的頻率相對較高，有2個單體型在亞洲人群中的分布頻率高于其他種群。（2）FSGS患者和正常組之間 APOL1基因拷貝數(shù)分布情況沒有統(tǒng)計學意義。多拷貝數(shù)和低拷貝數(shù)的FSGS患者之間治療后的緩解率無顯著差異。（3）轉染突變質粒的足細胞細胞骨架

5、蛋白排列紊亂，細胞發(fā)生溶解，細胞間隙增大，間接反映了足細胞足突的收縮；足細胞標志蛋白表達下降，P38MAPK、SAPKs和JNK等信號通路被激活；此外，APOL1新突變可能破壞了細胞膜氯離子通道蛋白。
　　在本研究中，我們從三個層面分析了APOL1基因變異與FSGS的關系。結果表明，APOL1基因的單核苷酸多態(tài)性在不同人群中分布有明顯差異。其拷貝數(shù)變異與我國FSGS易感性無密切相關性。我們前期發(fā)現(xiàn)的APOL1位點突變可能從多方面影