重組人胸腺素α原與細(xì)胞增殖的關(guān)系及其作為泌尿系統(tǒng)腫瘤標(biāo)記物的研究.pdf

1、胸腺素α原是一種在體內(nèi)廣泛表達(dá)的小分子量強(qiáng)酸性蛋白質(zhì)，進(jìn)化上高度保守，分布極其廣泛，淋巴組織及非淋巴組織均可找到，其相對(duì)分子質(zhì)量為12.5k，基因定位于第2號(hào)染色體上。它除了具有促進(jìn)機(jī)體免疫功能外，另一個(gè)重要功能是提高細(xì)胞的增殖能力，是細(xì)胞生長(zhǎng)和存活不可缺少的；缺乏ProTα的細(xì)胞不能分裂。由于ProTα與細(xì)胞增殖相關(guān)，而腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)烈的增殖活性，因而ProTα在腫瘤進(jìn)展中的作用成為研究焦點(diǎn)。ProTα參與腫瘤發(fā)生、細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)

2、。目前的研究主要集中于ProTα基因的調(diào)節(jié)機(jī)制及其在腫瘤診斷和治療中的價(jià)值。
　　 由于ProTα無(wú)二級(jí)結(jié)構(gòu)，免疫原性差，很難制備出對(duì)它的單克隆抗體，本研究分別采用ProTα與小分子載體蛋白KLH偶聯(lián)的方法，和運(yùn)用常規(guī)基因工程手段獲得GST-ProTα融合蛋白，增強(qiáng)ProTα的免疫原性，制備出較高效價(jià)的大鼠抗ProTα的多克隆抗體、小鼠抗ProTα的多克隆抗體和兔抗ProTα的多克隆抗體，之后采用細(xì)胞熒光免疫組化、石蠟切片免疫組

3、化、斑點(diǎn)雜交、Western-Blot等方法，將這些抗體應(yīng)用于正常增殖的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、組織蛋白、人體尿液、病理切片等的免疫親和反應(yīng)檢測(cè)，初步探討ProTα與細(xì)胞增殖的關(guān)系和在腫瘤組織中的表達(dá)，以及ProTα作為泌尿系統(tǒng)腫瘤標(biāo)記物的可行性。
　　 結(jié)果顯示，制備出的多克隆抗體效價(jià)較高，與抗原蛋白能產(chǎn)生較強(qiáng)的特異性結(jié)合。通過(guò)對(duì)處于分裂狀態(tài)下的非腫瘤細(xì)胞(包括小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞，腎小管細(xì)胞)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，這些分裂的細(xì)胞均被檢測(cè)有ProTα

4、高表達(dá)，并且集中在細(xì)胞核內(nèi)。以標(biāo)準(zhǔn)品ProTα做陽(yáng)性對(duì)照對(duì)膀胱腫瘤、腎腫瘤和前列腺癌患者尿液檢測(cè)，均能夠特異性檢測(cè)到其中的ProTα，腫瘤病人尿液的檢出率為100％，并且發(fā)現(xiàn)晚期病人樣品反應(yīng)強(qiáng)度比早期患者明顯增強(qiáng)，術(shù)前病人樣品明顯比術(shù)后病人樣品反應(yīng)強(qiáng)。泌尿系統(tǒng)炎癥等疾病尿液檢出率為53.8%，正常人只有9%，且顯示斑點(diǎn)明顯微弱，檢測(cè)下限為1ng/μL。作為一種篩選手段，敏感性和陰性預(yù)測(cè)比特異性更重要，也就是說(shuō)減少漏診率，因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)于