神經(jīng)源性尿路功能障礙大鼠輸尿管平滑肌細胞超微結構與Skca表達研究.pdf

1、目的：神經(jīng)源性尿路功能障礙(neurogenic urinary tract dysfunction，NUTD)是指與排尿相關神經(jīng)系統(tǒng)受到損傷，繼而出現(xiàn)的泌尿系功能障礙，其治療的目的和基本原則是保護尿路兼顧改善下尿路癥狀。然而，在長期的臨床工作中發(fā)現(xiàn)，下尿路功能障礙的部分患者在經(jīng)過降低膀胱儲尿壓力的治療后，仍然出現(xiàn)反流性上尿路損害。超微結構改變，特別是線粒體變化在平滑肌收縮發(fā)生中扮演重要角色。小電導鈣激活鉀通道（small-conduc

2、tance Ca2+-activated K+ channels，SKca）在調節(jié)平滑肌細胞興奮性中的作用也很關鍵。然而 SKca和超微結構在NUTD輸尿管平滑肌細胞中的變化情況尚不完全清楚，為全面掌握NUTD上尿路功能異常的機制，本研究通過對NUTD大鼠輸尿管平滑肌細胞Skca表達檢測及超微結構變化的進行觀察，為反流性尿路損害的早期預防提供新的方法。
　　方法：
　　1、建立動物模型：
　　選取體重200±20g的S

3、D雌性大鼠45只，由鄭州大學實驗動物中心提供，常規(guī)飼養(yǎng)20d，應用隨機數(shù)字表法分為實驗組（即NUTD組）、實驗對照組（即EC組）、空白對照組（即BC）組，每組15只。①空白對照組（BC組）：不做任何處理，應用影像尿動力學檢查確認其具有正常的尿路功能。②實驗對照組（NUTD組）：于建模前12 h禁食禁水，將SD雌性大鼠按每100 g體重腹腔注射0.3ml體積分數(shù)為10％的水合氯醛注射液，3-5 min后大鼠麻醉徹底，將大鼠固定在手術臺上，

4、固定體位為俯臥位，手術區(qū)域定位于L1棘突，專用剃毛機剃去手術區(qū)域毛發(fā)，消毒后鋪無菌洞巾。沿背部正中縱行切開皮膚，切口長約1.5cm，按層次分離皮下組織、淺筋膜、深筋膜、肌肉，暴露并剪去棘上韌帶，用血管鉗咬去L1棘突，暴露L1節(jié)段脊髓后完全離斷該段脊髓，并搗毀其以下節(jié)段的脊髓。后用生理鹽水沖洗傷口，填充明膠海綿，止血。局部涂抹青霉素以預防感染。后逐層關閉手術區(qū)域，縫合包扎。術后給予輔助排尿排便，并給予預防壓瘡措施。術后1周對大鼠進行影像尿

5、動力學檢查，以存在逼尿肌無收縮（ACD），無膀胱輸尿管反流，為動物模型建立標準。③實驗對照組（EC組）：只咬除L1棘突，未破壞脊髓。術后1周行影像尿動力學評估證實無明顯膀胱尿道功能障礙。
　　2、模型建立后6周三組大鼠均行輸尿管功能評估、形態(tài)學觀察和標本的制作。
　　3、采用熒光定量PCR測定、蛋白質印跡法檢測對輸尿管組織中SKca2、SKca3mRNA和蛋白進行測定
　　4、采用電鏡技術對輸尿管超微結構進行觀察

6、>　　結果：
　　1、大鼠動物模型建立后6周NUTD組大鼠膀胱均表現(xiàn)為無逼尿肌過度活動、膀胱逼尿肌無收縮。
　　2、30min內NUTD組產(chǎn)生尿量為（0.90±0.17）ml，EC組為（0.86±0.18）ml，BC組為（0.94±0.15）ml三組間差異無統(tǒng)計學意義，但NUTD組輸尿管蠕動頻率(16.23±2.35)次/5min顯著低于 EC組(21.80±1.97)次/5min和BC組（20.47±2.48）次/5min

7、，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。NUTD組USMC中SKca2和SKca3 mRNA表達相對于BC組平均分別上調4.15和4.56倍（P<0.01），蛋白表達也顯著上調（P<0.01）。蛋白表達也顯著上調（P<0.01）。
　　3、光鏡下三組大鼠輸尿管肌層、固有層和上皮細胞形態(tài)無明顯差異，未見充血、水腫及炎細胞浸潤。
　　4、電鏡下可見NUTD組USMC排列散亂，線粒體體積增大水腫、數(shù)目明顯大于另外兩組，線粒體嵴增粗、髓