兔神經(jīng)源性尿路障礙輸尿管功能變化和L型鈣離子通道表達差異的實驗研究.pdf

1、目的：
　　有效持久保護上尿路是神經(jīng)源性尿路功能障礙(NUTD)基本治療原則，但僅消除下尿路功能障礙的繼發(fā)尿動力學高危因素，并不能完全阻斷反流性上尿路損害發(fā)生，推測某些病理因素導致了原發(fā)性輸尿管功能障礙。L型電壓依賴性鈣離子通道(LVDCC)介導輸尿管平滑肌細胞(USMC)胞外Ca2+內流，對維持肌肉收縮與舒張功能具有重要作用。本研究在建立NUTD家兔模型的基礎上，對輸尿管形態(tài)功能進行評估，探索反流性上尿路損害的輸尿管原發(fā)性尿動力

2、學高危因素及觀察LVDCC在輸尿管的差異表達情況，為主動有效預防其發(fā)生反流性上尿路損害和阻斷其進展提供一種新的治療途徑。
　　方法：
　　30只健康日本大耳白兔隨機分為NUTD組、sham組、空白組，以復方鹽酸賽拉嗪注射液臀部肌肉注射進行麻醉，備皮，消毒鋪巾。于背部沿L5-L7做一2cm的縱形切口，暴露并咬除L6棘突，銳性橫斷脊髓并搗毀橫斷面以下的脊髓制成NUTD模型。sham組手術操作如上，但僅咬除棘突后即填充明膠海綿并逐

3、層關閉切口?？瞻捉M無以上操作。各組家兔均在術后2月行磁共振檢查觀察其脊髓損傷情況，并行影像尿動力學檢查觀察上尿路返流情況并記錄膀胱形態(tài)及最大膀胱測壓容量等參數(shù)。后取下腹正中切口，暴露膀胱，向上游離左側輸尿管并記錄30分鐘內蠕動次數(shù)(UP)和膀胱內產生尿液量(UV)。最后切取一側輸尿管以4％多聚甲醛固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋，制成切片后行HE染色并觀察其形態(tài)改變?？焖偾腥×硪粋确湃隓EPC處理過的凍存管中，測定分析各組家兔輸尿管中LVDCC的

4、mRNA及蛋白的差異表達情況。
　　結果：
　　NUTD組家兔均出現(xiàn)較嚴重的癱瘓癥狀，磁共振提示脊髓損傷，影像尿動力學提示逼尿肌無收縮，假手術組及空白組未提示有明顯異常。最大測壓膀胱容量、膀胱順應性、逼尿肌漏尿點壓、排尿期最大逼尿肌壓力三組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），但三組無上尿路返流現(xiàn)象發(fā)生。30min內產生尿量三組差異無統(tǒng)計學意義，NUTD組左側輸尿管蠕動次數(shù)顯著低于sham組和空白組(P＜0.001)。對其輸

5、尿管標本進行HE染色提示，三組輸尿管上皮細胞、固有層和肌層無明顯差異，但NUTD組外膜有不同程度的充血和炎細胞浸潤。熒光定量PCR檢測結果顯示，LVDCCmRNA在三組輸尿管均有表達，其NUTD組LVDCCmRNA表達水平較其它兩組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，sham組及空白組間無顯著差異（P≧0.05）;Westernblot檢測示LVDCC蛋白在三組輸尿管均有表達，經(jīng)灰度值分析，NUTD組表達降低(P＜0.001)，s